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    【摘要】探讨血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体阻滞剂缬沙坦对扩张型心肌病(DCM)大鼠炎症因子表达的影响及意义。方法： 腹腔注射多柔比星建立SD大鼠DCM模型。随机分为DCM模型组(M组, n=11)、缬沙坦组(V组, n=10)、正常对照组(C组, n=10)，V组予以缬沙坦30 mg·kg-1·d-1，C组和M组予以生理盐水灌胃，8周后行心脏超声和血流动力学检测，放免法检测血清TNF?α，IL?6，IL?1β浓度，测定心室质量及指数，观察心肌病理改变，测定心肌胶原含量(CVF)。结果： 与C组相比，M组左室内径、心室质量及指数显著增加(P<0.05)，心功能显著降低(P<0.05)，血清TNF?α，IL?6，IL?1β浓度和心肌胶原含量显著升高(P<0.05)。缬沙坦可以显著降低DCM大鼠血清TNF?α，IL?6，IL?1β水平和心肌胶原含量(P<0.05)，缩小左室内径、降低心室质量及指数(均P<0.05)，改善心功能(P<0.05)。结论： 缬沙坦可以通过降低DCM炎症因子表达，部分逆转心室重塑，改善心功能。

　　【关键词】 多柔比星 缬沙坦 扩张型心肌病 细胞因子

　扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy, DCM)是充血性心力衰竭(CHF)的重要原因之一。近年来，有研究者发现，TNF?α，IL?6，IL?1β等炎症因子与心力衰竭的发生、发展及预后密切相关［1］。本研究旨在观察血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体阻滞剂缬沙坦对DCM心力衰竭大鼠炎症因子表达的影响，探讨AT1受体阻滞剂治疗DCM心力衰竭的新机制。

1  材料和方法

1.1  材  料

1.1.1  实验动物  健康成年雄性SD大鼠，40只，体质量（254±27）g，由江苏大学实验动物中心提供。

1.1.2  试剂  多柔比星由浙江海正药业股份有限公司生产；氯胺酮由江苏恒瑞医药有限公司生产；缬沙坦由北京诺华制药有限公司馈赠；TNF?α，IL?6，IL?1β放射免疫试剂盒，北京北方生物技术研究所产品；VG染色试剂盒，福州迈新生物技术开发有限公司产品。

1.1.3  仪器和设备  Agilent Sonos5500彩超仪，美国Agilent公司产品；小动物电生理记录仪，澳大利亚Powerlab公司产品；病理切片机，德国LeicaRM2135；显微照相系统，德国LeicaQWIN3。

1.2  方  法

1.2.1  实验模型制备及动物分组  40只SD大鼠随机分为正常对照组(C组, n=10)，造模组30只。造模组用溶于生理盐水的多柔比星，浓度为2 mg·ml-1，剂量2 mg·kg-1·w-1，腹腔内注射，共8周，即多柔比星总累计量为16 mg·kg-1；正常对照组予以同体积生理盐水腹腔注射。正常对照组全部存活，造模组存活21只，对造模组进行心脏彩超的检测，证实大鼠扩张型心肌病模型复制成功，分为DCM模型组(M组, n=11)、缬沙坦组(V组, n=10)。V组予以缬沙坦30 mg·kg-1·d-1，C组、M组予以生理盐水，灌胃，8周后行相关检测。

1.2.2  心脏超声检测  探头采用S12型，频率为5～12MHz。氯胺酮(100 mg·kg-1)腹腔注射全身麻醉大鼠，8%Na2S脱毛，取左室短轴切面，在二维影像指导下测量左室舒张末内径(LVEDD)，左室收缩末内径(LVESD)，左室射血分数(LVEF)，左室短轴缩短率(LVFS)。所有指标均在3个连续的心动周期中由2个观察者分别观测取平均值。

1.2.3  血流动力学检测  氯胺酮(100 mg·kg-1)腹腔注射将大鼠全身麻醉，颈部正中切口，分离出右颈总动脉，将软质导管自右颈总动脉插入左心室，尾部连接生理记录仪的压力传感器，记录分析左心室压峰值(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室最大压力上升及下降速度(±dp/dtmax)。

1.2.4  血清TNF?α，IL?6，IL?1β检测  颈动脉取血8 ml，离心，取1 ml血清，加入10 μl抑肽酶，摇匀，-20℃保存，测定TNF?α；余血清-20℃保存，测定IL?1β，IL?6。操作按放免试剂盒测定步骤。

1.2.5  心室质量及指数的测定  待血流动力学检测、取血完成后开胸，取出心脏，以冰肝素生理盐水冲洗，分别称取左心室(含室间隔)实际质量(left ventricular actual weight, LVAW)和右心室实际质量(right ventricular actual weight, RVAW)，除以体质量(body weight)，得到左室质量指数(left ventricular weight index, LVWI)和右室质量指数(right ventricular weight index, RVWI)。

1.2.6  组织病理学检查和心肌胶原分析  将左心室放至10%中性甲醛液固定，剪取中段2～3 mm厚，常规石蜡包埋、切片、HE和VG染色，显微镜下观察。VG染色后，用计算机图文分析系统在400倍下行图像处理，每张切片选取5个不相互重叠的视野，计算每个视野中胶原组织所占百分比，心肌胶原容积百分比=胶原面积/全视野面积×100%，取平均数代表胶原容积百分比(CVF)。

1.2.7  统计分析  实验数据以均数±标准差(±s)表示，组间比较用单因素方差分析，两两比较用SNK法，P<0.05为差异有统计学意义。全部资料用SPSS13.0统计软件进行统计处理。快速论文发表

2  结  果

2.1  一般情况

正常对照组、DCM模型组、缬沙坦组仍存活大鼠分别为10，6和8只。缬沙坦组死亡率（20%）显著低于DCM模型组(45%），P<0.05，主要死亡原因为心力衰竭。

2.2  心脏超声测定结果

与正常对照组相比，DCM模型组LVEDD，LVESD显著增大(P<0.05)，LVFS，LVEF显著降低(P<0.05)；与DCM模型组相比，缬沙坦组LVEDD，LVESD明显减小(P<0.05)，LVFS，LVEF显著上升(P<0.05)。见表1。

2.3  血流动力学结果

与正常对照组相比，DCM模型组LVSP，+dP/dtmax，-dP/dtmax显著降低(P<0.05)，LVEDP显著升高(P<0.05)；与DCM模型组相比，缬沙坦组LVSP，+dP/dtmax，-dP/dtmax均明显升高(P<0.05)，LVEDP明显降低(P<0.05)。见表1。

2.4  心室质量及指数

DCM模型组左右心室质量及指数均显著大于正常对照组(P<0.05)；缬沙坦组左右心室质量及指数显著低于DCM模型组(P<0.05)。见表2。

2.5  血清TNF?α、IL?6，IL?1β浓度

DCM模型组血清TNF?α，IL?6，IL?1β水平显著高于正常对照组(P<0.05)。缬沙坦组明显低于DCM模型组(P<0.05)。见表3。 表1  各组大鼠超声心动图和血流动力学检测结果 表2  各组大鼠心室质量及指数检测结果表3  各组大鼠血清炎症因子浓度测定结果

2.6  组织病理学检查和心肌胶原分析

大鼠心肌HE染色显示：正常对照组心肌细胞形态正常；DCM模型组呈现灶状变性坏死，心肌细胞明显肿胀，心肌纤维局限性断裂，心内膜中胶原和弹性纤维增生，局灶性心肌纤维被纤维组织所替代，部分心肌细胞肌浆凝聚、细胞核固缩、变形或消失、脂肪变性，胞质内有空泡形成及淋巴细胞的浸润和成纤维细胞的增生；缬沙坦组上述变化明显减轻，见图1。大鼠心肌VG染色光镜下可见，正常对照组仅见少许胶原，DCM模型组可见胶原大量增生，缬沙坦组胶原增生明显轻于DCM模型组，见图2(图中正常心肌组织呈黄色，红色示胶原增生，将心肌细胞分隔成网筛状）。胶原容积百分比，DCM模型组显著高于正常对照组(P<0.05)，缬沙坦组显著低于DCM模型组(P<0.05)。见图3。快速论文发表

3  讨  论

心力衰竭时，机体处于免疫激活状态，TNF?α，IL?6，IL?1β等炎症因子水平显著上升［2］。TNF?α，IL?6，IL?1β可以通过直接降低心肌收缩功能、促进心肌细胞增生肥厚、进行性凋亡，导致心肌重塑；还可以促进氧化应激，降低心肌抗氧化能力［3］；TNF?α，IL?1β可以上调和活化基质金属蛋白酶（MMPs）［4，5］，激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)［6］，促进胶原沉积和心肌间质纤维化；TNF?α还可以通过直接上调AT1受体基因表达，增强血管紧张素2介导的促纤维化作用，上调转化生长因子（TGF），刺激胶原合成；在DCM中，TNF?α还可以由衰竭的心肌细胞分泌，TNF?α水平和左室舒张末容积具有明显相关性［7］。

DCM主要表现为心室扩大和收缩功能减退，最终出现致命性充血性心力衰竭。多柔比星具有心脏毒性作用，小剂量向大鼠腹腔注射多柔比星可以成功建立DCM动物模型，并且接近人类DCM病理生理过程［8］。

本研究结果显示，多柔比星诱导的DCM大鼠血清TNF?α，IL?6，IL?1β水平显著上升，左室内径，心室质量及指数明显增大，心肌胶原含量升高，心功能下降，提示DCM心力衰竭与TNF?α，IL?6，IL?1β过度表达有关。而在缬沙坦干预DCM后，可以明显降低血清TNF?α，IL?6，IL?1β水平，缩小DCM大鼠左室内径、降低心室质量及指数，降低心肌胶原含量，改善心功能。

缬沙坦作为一种血管紧张素Ⅱ1型受体阻滞剂，主要通过与AT1受体结合，竞争性抑制血管紧张素Ⅱ的生物学效应而发挥作用。其可能的机制为：①抑制AT1受体介导的血管紧张素Ⅱ的缩血管作用，减轻心脏的前后负荷，降低左室舒张末压，改善心脏舒缩功能。②阻断心力衰竭时被激活的肾素-血管紧张素系统，从而抑制增加心肌耗氧量、收缩外周血管的儿茶酚胺类物质的过度释放。③纠正心肌钙调蛋白和钙运转的紊乱，减轻心肌细胞内钙超载，恢复钙介导的兴奋-收缩偶联［9］。④有效抑制TNF?α，IL?6，IL?1β等炎症因子的表达，缓解因炎症因子引发的心肌细胞凋亡、胶原沉积和纤维化，逆转心室重构。

综上所述，炎症因子TNF?α，IL?6，IL?1β的过度释放可能是DCM心力衰竭的机制之一。长期应用AT1受体拮抗剂缬沙坦能有效地改善DCM的心脏舒缩功能，部分逆转心室重塑，其机制可能与其抑制炎症因子TNF?α，IL?6，IL?1β表达有关。

　　参考文献： 

　　［1］ Mann DL. Inflammatory mediators and the failing heart: past, present, and the foreseeable future［J］. Circ Res, 2002, 91(11):988-998.

　　［2］ Rivera M, Taléns?Visconti R, Jordán A, et al. Myocardial remodeling and immunologic activation in patients with heart failure［J］. Rev Esp Cardiol, 2006, 59(9):911-918.

　　［3］ Haudek SB, Taffet GE, Schneider MD, et al. TNF provokes cardiomyocyte apoptosis and cardiac remodeling through activation of multiple cell death pathways［J］. J Clin Invest, 2007, 117(9):2692-2701.

　　［4］ Brown RD, Jones GM, Laird RE, et al. Cytokines regulate matrix metalloproteinases and migration in cardiac fibroblasts［J］. Biochem Biophys Res Commun, 2007, 362(1):200-205.

　　［5］ Matsusaka H, Ikeuchi M, Matsushima S, et al. Selective disruption of MMP?2 gene exacerbates myocardial inflammation and dysfunction in mice with cytokine?induced cardiomyopathy［J］. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2005, 289(5):1858-1864.

　　［6］ Mitchell MD, Laird RE, Brown RD, et al. IL?1beta stimulates rat cardiac fibroblast migration via MAP kinase pathways［J］. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2007, 292(2):1139-1147.

　　［7］ Tsutamoto T, Wada A, Ohnishi M, et al. Transcardiac increase in tumor necrosis factor?alpha and left ventricular end?diastolic volume in patients with dilated cardiomyopathy［J］. Eur J Heart Fail, 2004, 6(2):173-180.

　　［8］ 白 洁，盛 佳，陈 蓉，等. SD大鼠扩张型心肌病模型的建立［J］. 江苏大学学报：医学版，2006, 16(3):210-212.

　　［9］ Shao Q, Ren B, Saini HK, et al. Sarcoplasmic reticulum Ca2+ transport and gene expression in congestive heart failure are modified by imidapril treatment［J］. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2005, 288(4):1674-1682.