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小麦MYB基因的表达分析

时间:2014-02-21 11:13 文章来源:http://www.lunwenbuluo.com 作者:梁小莉 颜倩 闫朵芳 点击次数:

   摘要 MYB转录因子在植物生长发育和响应外界环境胁迫中发挥着重要的作用。为了分析小麦MYB基因在小麦不同组织中的表达特性,采用半定量RT-PCR方法研究了小麦MYB基因在根、茎和叶中的表达。结果表明:MYB的转录本在3个组织中均有表达,在根中MYB表达量最高,叶中表达量最低。
  关键词 小麦;MYB 基因;表达
  中图分类号 S512.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2014)01-0029-01
  干旱、盐碱和极端的温度等非生物胁迫严重影响小麦的分布和产量,提高小麦对非生物胁迫的耐受性已经成为小麦育种的主要目标。利用转基因的方法,将一些优良的抗逆基因转化小麦,是提高小麦抗逆能力的一个主要方法。
  MYB转录因子在应答非生物胁迫中具有重要作用,例如TaMyb2-Ⅱ基因受干旱胁迫诱导表达[1-2]。TaMYB32基因受高盐胁迫诱导[3]。在前期克隆小麦MYB基因的基础上[4],分析在小麦不同组织中MYB基因的表达情况,为进一步研究基因的功能奠定试验基础。
  1 材料与方法
  1.1 试验材料
  挑选大小均匀的小麦种子30粒,用75%的酒精消毒1 min,用无菌水冲洗后,置于培养皿中,加入去离子水。在光照培养箱中20 ℃培养,生长20 d后,取根、茎和叶片,经液氮速冻后,于-70 ℃保存备用[5]。
  1.2 试验方法
  用TRIZOL试剂盒(TIANGENG)提取根、茎、叶组织的总RNA。利用AMV反转录酶(TaKaRa)发转录合成cDNA第1链。以分别转录的根、茎和叶组织总RNA为模板进行RT-PCR,RT-PCR反应体系和程序参见于月华等[4]。
  采用半定量RT-PCR方法,以小麦的根、茎和叶组织cDNA第一链为模板,检测MYB基因在3种组织中的表达情况。扩增引物为:F:5′-AACGCCGTCAAGAATCACT-3′和R:5′-GAAGAAACCGCCACCACTA-3′。以小麦actin基因为内参基因[1]。扩增体系为20 uL,扩增程序为:94 ℃预变性10 min,94 ℃变性30 s→60 ℃复性45 s→72 ℃延伸1 min,28个循环,72 ℃延伸10 min[6]。
  2 结果与分析
  利用半定量RT-PCR,分析在小麦根、茎和叶组织中MYB基因的表达特性。结果表明,该基因在上述3种组织中均有表达(图1)。利用Quantity One软件对电泳结果进行定量分析,表达量大小依次为根、茎和叶。

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