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    【摘要】目的 探讨真核细胞起始因子4E(eIF4E)在大肠癌组织中的表达，eIF4E与大肠癌发生、发展、临床病理特征及预后间的关系。方法 采用免疫组化法检测60例大肠癌组织中eIF4E的表达情况，以癌旁正常组织和大肠腺瘤各20例作对照。结果 大肠癌组织、癌旁正常组织和大肠腺瘤组织中eIF4E阳性表达率分别为91.7％、10％和90%，eIF4E阳性表达在不同性别、年龄、腺瘤史及肿瘤家族史患者间未见统计学意义，不同肿瘤部位、大小及分化程度、临床分期及有无淋巴结转移的eIF4E阳性表达差异也未见统计学意义(P＞0.05)，但肿瘤浸润深度不同eIF4E阳性表达不同(P＜0.05)。结论 大肠癌组织中存在着eIF4E蛋白高表达现象，eIF4E阳性表达与患者性别、年龄、腺瘤史、肿瘤家族史、病变部位、肿瘤大小、病理分化程度、临床分期及淋巴结转移无关，与浸润深度有关(P＜0.05)。

　　【关键词 】  大肠癌；真核细胞起始因子4E；免疫组织化学

　　　　近年来，真核细胞起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E)与肿瘤的关系日益受到重视。eIF4E即mRNA帽结合蛋白，在蛋白质合成的起始阶段起重要调控作用，是蛋白质合成的限速因子，参与细胞生长调节，并具有抗凋亡活性［1-4］。有关eIF4E在大肠癌方面的研究尚少，本研究通过检测eIF4E在大肠癌组织中的表达情况，探讨其在大肠癌发生、发展中的作用。

　　1  资料与方法

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　　1.1  临床资料

　　宁夏医学院附属医院2001—2003年收住且随访资料完整60例大肠癌患者，均经病理组织学确诊。其中男36例，女24例，年龄26～74岁，中位年龄56岁。有肿瘤家族史7例，大肠腺瘤病史 10例。肿瘤部位：直肠21例，乙状结肠12例，升结肠17例，横结肠3例，降结肠7例。组织学类型按WHO国际肿瘤学分类标准，其中：低分化腺癌17 例，高中分化腺癌43例。浸润深度：浆膜内9例，浆膜外51例。肿瘤大小：最长径≤5cm者32例，＞5cm者28例。按我国大肠癌Dukes分期标准进行临床分期：A期6例，B期33例，C期11例，D期10例。术后发现有淋巴结转移16例，无淋巴结转移44例；远处转移9例。根治性切除50例，姑息性切除10例。根治术后出现复发转移12例。所有患者术前均未接受化疗、放疗或针对肿瘤的非手术治疗。病例均随访2年以上，随访率100%；尚存活46例，死亡14例。取癌旁正常组织和大肠息肉各20例作为对照。

　　1.2 方法

　　兔抗人eIF4E多克隆抗体购于CST公司，DAB及免疫组化Elivision plus广谱试剂盒均购于福州迈新生物技术开发有限公司。所有标本经10％福尔马林固定，石蜡包埋、连续切片4μm厚，脱蜡水化。经微波炉热修复和 3％H2O2处理后，加eIF4E抗体4℃过夜。PBS洗片后加入第二抗体室温下孵育30min。PBS洗片后加入DAB显色液，光学显微镜显色，苏木素复染，脱水，封片。用PBS液代替一抗作阴性对照，用已知的肺癌阳性片作阳性对照。

　　1.3  结果判断

　　eIF4E定位于细胞浆，以细胞浆中出现棕黄色颗粒，而背景清晰为阳性。高倍镜下取10个不同视野，每个视野计数100个细胞，取平均值。结合阳性细胞所占百分比和染色强度进行半定量分析［5］：染色强度按下列标准评定：阴性为0分，π淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；染色的阳性细胞所占百分比评定：阴性为0分，阳性细胞数≤25％为1分，26％～50％为2分，51％～75％为3分，＞75％为4分。综合染色细胞百分比及染色强度分为三级：0～3分为阴性表达(-)；≥4分为阳性表达(＋)。

　　1.4  统计学方法

　　数据处理采用SPSS 13.0统计软件，χ2检验及Kaplan-Meier法，P＜0.05为差异有统计学意义。

　　2  结果发表论文期刊网

　　2.1  eIF4E在大肠癌组织、大肠腺瘤及癌旁正常组织中的表达

　　eIF4E在大肠癌组织及大肠腺瘤组织的表达较癌旁组织高(P＜0.05)；大肠癌组织与大肠腺瘤组织差异无统计学意义(P＞0.05)，详见表1，免疫组化表达见图1～3(见封2)。表1  eIF4E在三种组织中表达水平的比较（略）

　　2.2  eIF4E表达与大肠癌一般临床特征的关系

　　不同性别、年龄、腺瘤史及肿瘤家族史患者的eIF4E阳性表达差异未见统计学意义(P＞0.05)，详见表2。表2  eIF4E的表达与大肠癌患者一般临床特征的关系（略）

　　2.3  eIF4E表达与大肠癌病理特征的关系

　　不同肿瘤部位、大小及分化程度组织eIF4E阳性表达差异未见统计学意义(P＞0.05)，详见表3。表3  eIF4E表达与大肠癌病理特征的关系（略）

　　2.4  eIF4E表达与大肠癌临床分期的关系

　　eIF4E阳性表达与临床分期及淋巴结转移情况无关(P＞0.05)，而与肿瘤浸润深度有关(P＜0.05)，阳性表达率随浸润深度的增加而增高。表4  eIF4E表达与临床分期的关系（略）

　　2.5  eIF4E表达与大肠癌根治术后复发转移的关系

　　eIF4E在根治术后无复发转移的38例中阳性表达34例，有复发转移12例均为阳性表达，表达率分别为89.5％及100％，两组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

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　　2.6  eIF4E表达与大肠癌患者生存的关系

　　eIF4E表达阳性者生存曲线较阴性者降低，2年生存率eIF4E(-)者为100％，(＋)者为87.0％，(＋＋)者为69.6％。(-)、(＋)及(＋＋)三组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)，(详见图4，见封3)。

　　3  讨论

　　eIF4E是分子量为25kD的细胞质蛋白，基因定位于4号染色体。正常情况下，eIF4E的表达水平低，主要用于维持细胞正常生命活动。高水平 eIF4E选择性增加体内影响细胞生长、分化的蛋白质的合成，促进细胞的增殖反应，并对癌基因表达起重要作用，导致细胞恶性转化。也发现eIF4E在一些肿瘤中高表达，调控肿瘤恶性相关基因和因子的表达，参与肿瘤的侵袭和转移。

　　Rosenwald等［6］报道eIF4E在大肠癌组织中出现高表达，证实eIF4E表达水平增高是大肠癌发生的早期事件。Barkeld等［7］检测结肠癌、结肠息肉及正常组织中eIF4E的表达情况，发现结肠癌中eIF4E表达水平最高，而正常组织表达水平最低，说明其对结肠癌的发生起重要作用，他们通过多元分析进一步发现，eIF4E的表达与结肠癌患者性别、年龄、种族、息肉史及结肠癌家族史没有相关性。本研究结果显示eIF4E在大肠癌组织中的阳性表达率为91.7％，在癌旁组织中阳性表达为10％，在大肠腺瘤中阳性表达为90％。大肠癌及大肠腺瘤与癌旁正常组织相比差异有统计学意义 (P＜0.05)，大肠癌与大肠腺瘤间的阳性表达率差异无统计学意义，提示eIF4E参与了大肠黏膜的早期癌变，在大肠癌的发生中起了重要作用。本研究未发现eIF4E的表达与患者性别、年龄、病变部位、肿瘤大小有关，与上述Barkeld［7］的研究结果一致。

　　本研究结果显示eIF4E的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期无关，而与原发病灶浸润深度密切相关。这与一些作者将该指标用于其它肿瘤研究的结果不完全一致［1，5，8-9］，进一步说明肿瘤的浸润、转移机制复杂，尚难得出一致结论。本研究发现eIF4E表达与根治术后有无复发转移及生存率之间无关，提示eIF4E可否作为大肠癌的预后指标尚需进一步论证。

　　参考文献： 

 　 ［1］Rosenwald IB.The role of translation in neoplastic transformation from a pathologists point of view［J］.Oncogene，2004，23(18)：3230-3247.

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　　［5］刘子沛，朱瑾，周金莲，等.胆管癌组织中真核细胞翻译起始因子4E和基质金属蛋白酶-9 的表达及临床意义的研究［J］.消化外科，2005，4(2)：113-118.

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　　［6］Rosenwald IB，Chen JJ，Wang S，et al.Upregulation of protein synthesis initiation factor eIF4E is an early event during colon carcinogenesis［J］.Oncogene，1999，18(15)：2507-1257.

　　［7］Berkeld H，Elba A，Turbat H.Expression of the Translation Initiation Factor eIF4E in the Polyp-Cancer Sequence in the Colon1［J］.Cancer，2001，10：663-666.

　　［8］方向明，熊碧芳，彭波，等.真核细胞起始因子4E及c-myc在胃癌中的表达［J］.武汉大学学报，2005，26(5)：579-581.

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