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　　【摘要】目的了解上海市浦东新区5岁以下儿童腹泻病的病原谱构成、病原特征，为制定预防控制措施提供依据。方法对2012年2月-2013年1月，浦东新区人民医院、儿童医学中心两家监测点医院对619例腹泻患儿进行个案调查，同时采集粪便标本进行肠道致病菌和病毒的检测。结果病毒检出率分别为：NV（11.95%）、RV（7.27%）、EADV（2.91%）、SPV（1.45%）、ASTV（0.97%）；细菌检出率分别为：致泻性大肠埃希菌（5.65%）、非伤寒沙门菌（2.42%）、弯曲菌（0.81%）、嗜水气单胞菌（0.65%）、志贺菌（0.48%）、小肠结肠炎耶尔森菌（0.32%）；病毒的检出率8月份至来年的3月份为27.70%，高于其他月份的18.48%，（=7.18，P<0.050）；细菌的检出率4月份至10月份为15.34%，远高于其他月份的3.15%，（=31.22，P<0.050）。结论NV为浦东新区5岁以下儿童病毒性腹泻的最主要的病原；致泻性大肠埃希菌为细菌性腹泻的最主要病原。提示细菌性腹泻以夏秋季防控为重点；病毒性腹泻应以全年为重点。
　　关键词：腹泻病；病原谱；监测中图分类号：R181；R183.4
　　腹泻病是由多病原多因素引起的一种疾病，可由感染及非感染因素所致，感染性腹泻有细菌感染和病毒感染。随着疾病谱的变迁，在上海地区一些曾经严重危害人群健康的肠道传染病，临床表现越来越不典型，发病率已降低至较低水平；随着分子流行病学的进步以及监测系统的完善，小肠结肠炎耶尔森菌、类志贺邻单胞菌等少见菌亦有检出，故加强对腹泻病的监测工作，追踪病原谱的变迁趋势，为制定防治策略提供依据显得十分必要。为了掌握浦东新区5岁以下儿童腹泻病的主要病原体及流行特征和毒株变化趋势，在我区开展了5岁以下儿童腹泻病病原谱监测，现报道如下。
　　1对象与方法
　　1.1调查对象
　　自2012年2月-2013年1月，在本区设置浦东新区人民医院、儿童医学中心为监测点医院。调查的腹泻儿童需满足：①每日排便3次或3次以上，且大便性状有改变；②年龄在0～59月龄的儿童。同一患者治愈后间隔7天再次腹泻，定义为发生另一次腹泻。
　　1.2调查内容和方法
　　监测点医院发现符合监测病例定义的患者时，采集标本同时填写个案调查表，调查内容主要包括：儿童基本情况，入院情况（发病、就诊日期，症状、大便常规检测结果）、标本采集信息。
　　1.3采样方法
　　采集性状改变的粪便5克/5毫升，置于无菌粪便采样杯（不加任何试剂），用3支无菌棉拭多点采集粪便标本（如有脓血或黏液应挑取脓血、黏液部分，液体粪便应取絮状物，使棉拭表面布满粪便），置于试管内，试管内标本放置在4-8℃冰箱中保存不超过24h，采样杯内标本采集后30分钟内立即将标本放置在-20℃冰箱中。采集标本的时间需覆盖全年各月，每家监测点医院每周采集标本5-8例。
　　标本送至浦东疾控微检科进行肠道致病菌（致泻大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌、弧菌、类志贺邻单胞菌、嗜水气单胞菌）、诺如病毒（NV）、轮状病毒（RV）、肠道腺病毒（EADV）、星状病毒（ASTV）、扎如病毒（SPV）的检测。
　　1.4检测方法和试剂
　　1.4.1病毒检测试剂和方法
　　1.4.1.1主要试剂：检测试剂均采用商品化核酸扩增荧光检测试剂盒，其中，NV、EADV试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司，RV、ASTV和SPV试剂盒购自上海之江生物科技有限公司，所有试剂均在有效期内使用。
　　1.4.1.2实验方法：粪便标本处理：取2g左右粪便加入装有10ml磷酸缓冲液的15ml离心管中，拧紧离心管，用震荡器剧烈震荡，用冷冻离心机离心3000g×10min，取200μl上清液用QIAxtractor全自动核酸抽提仪提取核酸，得到总核酸体积为60μl，备用。
　　1.4.1.3.实时荧光定量-聚合酶链反应（real-timequantitativePCR，RQ-PCR）：检测根据商品化的RV、NV、ASTV、SPV、EADV实时荧光试剂盒说明书，将提取好的核酸标本在OPTICON2实时荧光定量PCR仪、7500fast实时荧光定量PCR仪以及7000实时荧光定量PCR仪上进行RQ-PCR反应。试剂配制及荧光PCR反应条件参见试剂盒说明书。
　　1.4.2细菌检测试剂和方法
　　1.4.2.1主要试剂碱性蛋白胨水增菌液、改良磷酸盐缓冲液增菌液、麦康凯培养基、TCBS培养基由上海市疾病预防控制中心腹泻病试剂供应中心提供；沙门菌SBG增菌液、沙门菌显色平板由科玛嘉科技股份有限公司提供；XLD培养基、气单胞培养基、CIN培养基干粉试剂由英国OXOID公司提供。
　　1.4.2.2试验方法肠道病原细菌检测方法参照中国疾病预防控制中心腹泻症候群监测技术方案，大肠杆菌、志贺菌采用直接接种培养基；致泻性弧菌（霍乱弧菌、副溶血性弧菌）、沙门菌、气单胞菌、类志贺邻单胞菌、小肠结肠炎耶尔森菌采样增菌后，接种相应的培养基，在适宜的培养温度下，培养18-24小时后挑取可疑菌落进行进一步的生化鉴定分析。
　　1.5资料收集及统计方法
　　运用Epidata3.0建立数据库，数据进行双录入。用SPSS16.0软件进行数据分析，卡方检验对多个标本率进行比较。