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　　摘 要：本实验通过醇提法提取秦巴山区竹叶中的黄酮类化合物，研究了提取剂用量、提取剂浓度、提取浸泡时间、提取液pH值等因素对黄酮提取率的影响，并通过正交试验确定最佳提取工艺。结果表明：在秦巴山区竹叶中提取总黄酮类化合物提取剂用量40mL、提取剂浓度80%、提取浸泡时间30min以及提取液pH值为7.5的条件下效果最佳。

　　关键词：竹叶 黄酮类化合物 醇提法

　　竹叶在我国拥有较长的食用和医用历史，是我国认可批准的可医用、食用的天然绿色植物[1]。且竹叶里含有丰富的有机物质和人体必需的微量元素，有研究表明，竹叶里含有大量的有生理活性的黄酮类化合物，具有较高的研究采食价值[2]。在秦巴山区竹林类型多、分布广、资源含量甚多，是我国不可多得的一大宝藏。

　　黄酮类化合物广泛存在于植物中。有研究表明，黄酮类化合物有抗氧化、清除自由基的活性，还有一定的抗脂质过氧化能力，抑制癌细胞、抗衰老、预防老年性痴呆症等重要生理和药理作用。对于多种疾病有良好的治愈效果，医学研究及药用价值甚高[3-4]。目前，我国对黄酮类化合物的提取方法还是采用比较传统的沸水提取法、醇提法、有机溶剂萃取法。随着我国科学技术的高速发展，近年来对黄酮类化合物的提取和检测方法也有创新，如微波辅助萃取、超声波辅助萃取和超临界CO2萃取法等。对黄酮类化合物提取方法各有差异，吸引着不少科研爱好者研究[5]。

　　本试验采用了醇提法提取秦巴山区竹叶中总黄酮类化合物，研究了在提取过程中不同因素对黄酮提取率的影响，并且通过正交试验的方法对提取剂用量、提取剂浓度、提取浸泡时间以及提取液pH值等因素进行研究，最终确定醇提取秦巴山区竹叶中总黄酮类化合物的最佳工艺。

　　1 材料与方法

　　1.1 原料与仪器

　　竹叶（采摘于秦巴山区某地）；芦丁（上海生化制剂厂）；无水乙醇（西安化学制剂厂，分析纯）；亚硝酸钠（西安化学制剂厂，分析纯）；硝酸铝（太原欣力化学品生产厂，分析纯）；氢氧化钠（西安化学制剂厂，分析纯）。

　　FW177型中草药粉碎机（湖南中诚制药机械厂）；DGG9140B型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信试验仪器有限公司）；760CR紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；电子天平（上海第三分析仪器厂）；旋片式真空泵（上海沪冈真空泵制造有限公司）；标准检验筛（浙江上虞市道墟张兴纱筛厂）；布什漏斗；抽滤瓶；烧瓶；试管；移液管；锥形瓶；容量瓶。

　　1.2 实验过程与方法

　　1.2.1 提取工艺流程

　　竹叶→烘干→粉碎→称样→浸泡提取→抽滤→稀释定容→样液。

　　1.2.2 芦丁标准曲线的建立

　　准确称取标准芦丁对照品38.60mg，置于50mL烧杯中，加适量50%的乙醇溶解，转至50mL容量瓶，再用少量50%乙醇洗涤烧杯2～3次转移至容量瓶并定容至刻度线，摇匀，得浓度0.7720g/L的芦丁标准对照试液。

　　精确移取芦丁标准对照试液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，分别置于25mL容量瓶中，各加50%的乙醇至10mL，再分别加配好的质量分数5%的亚硝酸钠溶液1mL，摇匀放置6min，加质量分数10%的硝酸铝溶液1mL，摇匀放置6min，加质量分数5%的氢氧化钠溶液10mL，最后用50%的乙醇定容至刻度线，摇匀放置15min。以50%的乙醇作参比溶液，于500nm处测定吸光度。以芦丁标准对照试液浓度c（g/L）为横坐标，以吸光度A为纵坐标绘制标准曲线（见图1），得到芦丁标准对照试液浓度c与吸光度A关系的线性回归方程：A=0.5706c+0.0088（R2=0.9960）。

　　1.3 样液制备

　　将在秦巴山区采摘的竹叶清洗干净，放于干燥箱干燥，等完全干燥后取出进行粉碎，用100目标准检验筛筛选，取其样品干燥粉末。

　　准确称取样品干燥粉末1.0000g（±0.0020）若干份，加入一定浓度的乙醇提取剂若干毫升，调整提取液一定pH值，在室温下提取浸泡一定时间后抽滤，转移滤液于100mL容量瓶中，用一定浓度提取剂稀释、定容至刻度线，准确量取上清液1mL于50mL容量瓶中，分别加入配好的质量分数5%的亚硝酸钠溶液1mL，摇匀放置6min，加质量分数10%的硝酸铝溶液1mL，摇匀放置6min，加质量分数5%的氢氧化钠溶液10mL，最后用一定浓度的乙醇若干毫升定容至刻度线，摇匀放置15min。以试剂空白为参比溶液，用1cm的玻璃比色皿在500nm处测量其吸光度3次，取平均值代入线性回归方程计算出总黄酮含量，并计算总黄酮提取率。

　　1.4 样液中总黄酮含量提取率的测定

　　式中：A-样液吸光度；V-样液体积；M-样品称取质量。

　　2 结果与讨论

　　2.1 单因素试验

　　2.1.1 提取剂乙醇用量对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响