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　　用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g（±0.0020）6份置于锥形瓶中，分别加入60%的乙醇10mL、15mL、20mL、25mL、30mL、40mL，调整pH值为7.0，在室温下浸泡提取30min抽滤，转移滤液至100mL容量瓶中，用60%的乙醇定容至刻度线，用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中，按照1.3中方法测定其吸光度，得到提取剂用量对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势（见图2）。

　　由图2可知，提取剂乙醇用量在<30mL时对竹叶中黄酮类化合物提取率影响较大，当乙醇用量达到30mL时黄酮类化合物提取率达到最大值8.441%，在30mL之后影响逐渐减弱，在40mL时黄酮类化合物提取率反而下降，这可能是由于溶剂中有效成分浓度高，临界层浓度差小，原料的有效成分不利于扩散引起的。因此，对竹叶中总黄酮类化合物提取中提取剂用量控制在20～40mL为好。

　　2.1.2 提取剂浓度对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响

　　用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g（±0.0020）5份置于锥形瓶中，分别加入30mL浓度为40%、50%、60%、70%、80%的乙醇，调整pH值为7.0，在室温下浸泡提取30min抽滤，转移滤液至100mL容量瓶中，分别用对应浓度的乙醇定容至刻度线，用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中，按照1.3中方法测定其吸光度，得到提取剂浓度对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势（见图3）。

　　由图3可知，竹叶中黄酮类化合物提取率随着提取剂浓度的增加而增加，在70%后影响逐渐变小，在浓度为80%的时候达到最大值8.208%。因此，从经济方面考虑，对竹叶中总黄酮类化合物提取中提取剂浓度最好控制在60%～80%。

　　2.1.3 提取浸泡时间对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响

　　用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g（±0.0020）5份置于锥形瓶中，加入60%的乙醇30mL并调整提取液pH值为7.0，在室温下分别浸泡提取10min、20min、30min、40min、50min抽滤，转移滤液至100mL容量瓶，用60%的乙醇定容至刻度线，用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中，按照1.3中方法测定其吸光度，得到提取剂提取浸泡时间对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势（见图4）。

　　由图4可知，在一定时间内随着提取浸泡的时间的增加，竹叶中黄酮类化合物的提取率明显增加，但是随着时间的延长，提取率会有所下降。其中提取浸泡时间为40min时候达到最高值7.069%，在50min时提取率下降，这是提取剂中乙醇挥发，导致提取剂中有效成分减少的原因。所以，对竹叶中总黄酮类化合物提取的提取剂浸泡时间控制在30～50min为佳。

　　2.1.4 提取液pH值对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响

　　用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g（±0.0020）6份置于锥形瓶中，加入60%的乙醇30mL，分别调整提取液pH值为5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0在室温下分别浸泡提取30min抽滤，转移滤液至100mL容量瓶，用60%的乙醇定容至刻度线，用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中，按照1.3中方法测定其吸光度，得到提取剂提取液pH值对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势（见图5）。

　　由图5可知，提取液pH值在一定程度上影响竹叶中总黄酮类化合物的提取，但影响力度不大。实验中黄酮类化合物最高、最低提取率极差仅为1.010%，所以调整提取液pH值为7.5即可。

　　2.2 正交试验

　　以单因素实验为依据，为全面分析研究提取剂用量、提取剂浓度、提取浸泡时间、提取液pH值等因素对竹叶中黄酮类化合物提取的影响，选用在实验过程中提取率较高的范围进行L9（34）正交试验。结果见表1、表2、表3。

　　分析表2得出，对于醇提取竹叶中总黄酮类化合物的4个影响因素中，黄酮类化合物提取率影响力度大小：提取剂用量>提取剂浓度>浸泡时间>pH值。且醇提取秦巴山区竹叶中总黄酮类化合物的最佳工艺为A3B3C1D2。即采用浓度80%的乙醇40mL，在提取液pH值为7.5的条件下室温提取浸泡30min，其提取率最高。

　　由于正交试验中没有包含该试验组，所以继续进行验证实验。在最佳工艺条件下，按照1.3中方法进行3组平行实验后，得到黄酮类化合物提取率8.664%，高于单因素实验中提取率最高值8.441%（2.1.1）。

　　3 实验结论

　　本实验设计了单因素实验和正交试验的方法，最终确定了醇提取竹叶中总黄酮类化合物的最佳条件，即用浓度为80%的乙醇提取剂40mL在提取液pH7.5的室温环境下提取浸泡30min，其黄酮类化合物提取率高达8.664%。其提取过程中的影响因素中，乙醇提取剂用量的影响力度最大，所以用适量的提取剂有助于提高黄酮类化合物的提取率。

　　参考文献

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