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　　2.3外植体的种类和大小
　　油棕的胚培养较少褐变，而叶片因组织高度分化容易褐变。巨桉的叶片由于因切割损伤的面积大，所产生的酚类比茎节多。荔枝老熟的茎段褐化严重，顶芽的效果则好于侧芽。Bonga认为外植体越小，切面与体积的比率越大，伤害及褐变的程度就越大。在卡德兰新茎的培养中也有类似的结果，新茎越大成活率越高。
　　2.4培养基
　　在巨桉的器官培养中发现，褐变由于培养基中的某些成分，例如高浓度的糖、丝氨酸、细胞分裂素及硼的存在和光照等而加剧。类似情况也出现在油棕、核桃组织培养中。在芹菜原生质体培养中，MS、NT培养基中碳源为蔗糖，氨态氮含量远高于Dudits培养基，褐变也比后者严重。把核桃分别在固体、半固体和液体培养基上培养，结果半固体培养基芽的诱导成功，而其他培养基上都发生了氧化褐变。凤梨外植体用液体培养可解决褐变。在甘蔗的组织培养中，BA、KT可刺激PPO的活性。培养基的pH值可能对酚类与酚氧化酶结合部位产生影响。石井在卡德兰培养中发现，培养基pH为4.0~5.0时，外植体排出的褐化物多，而PH为5.5时则褐化物排出少。
　　2.5防褐剂
　　一类防褐剂是酚氧化酶抑制物，如抗坏血酸酸( V c) 将该酶的Cu2+还原成Cu+;EDTA可以把Cu2+从酶中鍪合出来抑制酶的活性，但EDTA同时也鏊合了部分Ca2+、Mg2、Zn2+等离子，使其他酶的活性受到一定影响，造成外植体的启动延迟。另一类是影响酚类化合物与酶结合部位的物质，如硫脲、亚硫酸氢钠、二乙基二硫代氨基甲酸钠等。何琼英等认为Vc在PPO作用下将醌类物质重新还原为酚。
　　防褐剂还可分为防止酚氧化的抗氧化剂和吸收醌类物质的吸收剂两大类。抗氧化剂有Vc、半胱氨酸，此外还有芸香苷w、酪氨酸、柠檬酸、巯基乙醇、卵清蛋白牛血清蛋白等。吸收剂有PVP和活性炭（AC)等。
　　2.6培养条件
　　光能促进多种植物组织培养中酚的氧化光照条件对巨桉叶片渗出物形成的影响从低到高为：黑暗、漫射光、短日照、长日照。在低光照或置于黑暗中培养一段时间能减轻褐变。温度过高使pp〇的活性提高，从而加速培养的组织褐变。石井发现卡德兰培养在25-30高温下，褐变物质渗出量大，而在15-20°C时渗出量小。
　　3减少褐化的措施
　　3.1母株和外植体的预处理
　　苹果叫防褐有效的措施是对母株遮光，母株经温室一般栽培后外植体在固体培养基培养前先在液体培养中短期培养，外植体采自热处理母株。为了使细胞的伤害降到最低，用于切割的解剖刀必须尽可能地尖锐，解剖刀的消毒不能过分灼烧，否则会使刀刃变钝。将核桃、巨桉、苹果[16]外植体在5T下进行低温预处理一段时间均有助于减轻褐化。红豆杉采用45T预处理对克服褐变也有效，但对组织的活力有较大的损伤，影响愈伤组织的发生。切割外植体时在抗氧化剂或吸收剂中进行，或用这些药剂保存刚切下来的组织，由于隔离了切面伤口的氧气和抑制PPO的活性等原因，可减少褐变。如油棕、红豆杉、香蕉、魔芋等的组织培养前可采用此法。但对那些组织快速氧化的植物，如苹果M9、油橄榄用抗氧化剂处理则没有效果。预培养有助于避免酚类物质和其他生长抑制物的毒害作用。在20年生的柠檬桉母本植株上采集的茎芽，需先在液体培养基上培养3d，然后再在半固体培养基上培养。苹果和悬钩子属植物也使用类似方法。又如核桃外植体预先在只含蔗糖的培养基中培养5-7d;茶树带少量叶的茎段预培养15d；板栗最初2-3d用含有0.4%的咖啡碱或含有石灰的培养基，使形成层伤口排出的单宁沉淀均有助于减轻褐化。
　　3.2选择适宜的培养基及培养条件
　　在最适宜的培养条件下，外植体处于旺盛的生长状态，有较强的分生能力，便可大大减轻褐化。油棕用改良MS、苹果M7使用1/2MS培养基可减轻褐化；在初始培养时把植物的外植体处于不适合酚类合成的条件下，如在黑暗或弱光中培养，可抑制酚类的氧化。切·卡德兰开始培养时，温度保持在15-20°C，培养基调至5.5有助于减少褐化。
　　3.3培养基中加入防褐剂
　　在静止的液体培养基中加人防褐剂的效果比在固体培养基中加入要明显得多。AC除了吸收有毒物质外，也能吸附培养基中的生长调节剂，故棕榈组织培养中，在培养基中加0.3%AC，需要加人高浓度的生长素以诱发愈伤组织的形成。