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　　1.2试验菌悬液制备 

　　试验菌为金黄色葡萄球菌（ATCC 6538） 、大肠杆菌（8099） ，购自中国兽医药品监察所。取各冻干菌种管，在无菌操作下，用毛细吸管向其加入适量营养肉汤，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。取少许滴入含 5.0～10.0 mL 营养肉汤的试管，置37℃培养24 h。每株菌培养2组。每组从原液开始用含1 g/L胰蛋白胨生理盐水进行10倍梯度稀释，直至10-10，共11个稀释浓度。

　　1.3细菌计数试验 

　　1.3.1常规检测法于超净工作台将冷却至40～45℃的熔化营养琼脂培养基倾注于平皿中，每平皿15～20 mL。每组取11个稀释度菌悬液涂板培养，接种体积为1 mL，翻转平皿，使底向上，置37℃温箱内培养16～48 h，观察并进行细菌计数。每个稀释度重复3皿。 

　　1.3.2ATP计数仪检测法将棉拭子分别浸入每组11个稀释度菌悬液3～4 s，然后将棉拭子插入检测管，用拇指和中指捏住球管，从吸阀处折断。轻挤球管2次，挤出球管内液体。再将检测管放入发光仪中，盖上盖子，开始检测，根据数显仪判读结果。对所有菌悬液的所有梯度均用ATP荧光计数仪进行检测，并记录数据。 

　　1.4相关性分析 

　　用Microsoft Excel进行相关性分析，以lg（细菌数）为横坐标，以ATP荧光值（RLU）为纵坐标，分别进行线性、对数、乘幂、指数拟合。 

　　2结果与分析 

　　2.1不同菌落数对应的ATP荧光值 

　　由表1看出，该试验中最少菌落数（32～200个/mL）也能读出荧光值，对应lg（菌落数）为1.51～2.3。而根据仪器公司提供的参考限量标准，最高要求的乳品、果汁等高风险产品加工表面合格菌要求RLU值<150，由此说明该仪器具有较好的灵敏度。同时发现，随着菌落数的降低，RLU值也在降低，二者呈正相关关系。 

　　2.2菌落数与ATP荧光值的不同曲线拟合研究 

　　以lg（菌落数）为横坐标（x），以ATP荧光值（y）为纵坐标，分别进行线性、对数、乘幂、指数拟合，相关系数见表2。因为RLU值与lg（菌落数）呈正相关关系，所以不采用多项式拟合。由表2可见，线性与对数相关系数均在0.8以下，没有统计学意义；乘幂拟合的相关系数较好，但是所有数值均低于指数拟合。大肠杆菌与金黄色葡萄球菌指数相关系数相当，均集中在0.9左右，可见该方法对革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌均有效。 

　　3讨论与结论 

　　ATP荧光计数仪还是一个前沿产物，已有部分研究证明其可以在一定程度上代替细菌常规检测6～8。但从数值上看，二者仍然存在一定差异，例如王绍鑫等（2013）9发现，ATP荧光检测总合格率为61.30%，实验室细菌计数法总合格率为83.70%。在数据分析方面，刘俊江等（2013）6认为菌落总数对数值与发光强度对数值呈线性关系，y=0.61032x+0.07459，相关系数R2=0.96073。而本研究发现在4个试验中，菌落数与荧光值线性相关系数很低，而指数相关系数较高，在0.89～0.96之间。深入对比发现，本试验构建的是梯度稀释模型，菌落数跨度从102～1013，而很多研究仅是检测现实样品，其菌落数多数集中在102～105 10。这从侧面证明，菌落数与荧光值线性相关系数仅在一定范围内有效，而扩大到细菌可能的最大浓度发现，二者基本呈指数相关。结论认为ATP荧光检测可以在一定程度上代替细菌常规检测，并应用于实际生产。 

　　参考文献： 

　　[1] 

　　史帅.ATP荧光法快检系统实现细菌总数的快速检测[J].食品安全导刊，2008（3）：51-52. 

　　[2]Thaller M C，Renzini G. Reliability of a bioluminescence ATP assay for detection of becteria [J].Journal of Clinical Microbiology， 1992，30（7）：1739-1742.