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葡萄籽中原花青素的提取的方法分析

时间:2013-08-14 16:24 文章来源:http://www.lunwenbuluo.com 作者:论文部落 点击次数:

      1材料与方法
  1?1材料
  巨丰葡萄籽;原花青素,无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、三氯甲烷、水均为分析纯。
  1?2设备
  食品粉碎机,北京环亚天元机械技术有限公司;722紫外可见分光光度计,上海悦丰仪器仪表有限公司;电子天平,上海卓精BSM—2100;恒温水浴锅,广州威德玛环境仪器有限公司;85-2数显恒温磁力搅拌器;紫花牌循环水真空泵;飞鸽牌系列离心机。
  1?3试验方法
  1?3?1标准曲线的绘制
  分别取原花青素标准液1?00、2?00、3?00、4?00、5?00mL于10mL刻度试管中,加入无水乙醇定容至10mL,塞紧后充分摇匀,制得浓度分别为10?4、20?8、31?2、41?6、52?0ug/mL的标准系列溶液。在500nm处以无水乙醇作空白调零扣除背景值,测定标准系列溶液吸光值A,并绘制原花青素浓度-吸光值标准曲线。溶液中原花青素浓度在10?4~52?0ug/mL范围内,与吸光值A呈线性关系,其回归方程式为A=3?612C-0?032,相关系数r=0?9991。
  图1原花青素浓度-吸光值标准曲线
  提取率=ncv/m×100%
  n 提取剂稀释倍数
  c 稀释后提取液中花青素浓度 mg/mL
  v 提取剂体积mL
  m 葡萄籽质量mg
  1?3?2提取时间的确定
  准确称取2?00g葡萄籽粉5份(经过石油醚脱脂处理),分别取乙醇溶液(浓度为70%)14mL与之混合,分别于50℃水浴中加热提取30min、40min、50min、60min、70min,自来水冷却至室温,并经离心机离心20min(4 000r/min),最后取上清液测原花青素含量。
  1?3?3提取温度的确定
  准确称取2?00g葡萄籽粉5份(经过石油醚脱脂处理),分别取乙醇溶液(浓度为70%)14mL与之混合,于30℃、40℃、50℃、60℃、70℃水浴中加热提取30 min,自来水冷却至室温,并经离心机离心20min(4000r/min),最后取上清液测原花青素含量。
  1?3?4料液比的确定
  分别称取2?00 g石油醚脱脂后的葡萄籽5份,按1:6、1:7、1:8、1:9、1:10的比例与70%的乙醇溶液混合,于50℃水浴中提取30min,自来水冷却至室温,4000r/min离心20min,取上清液测原花青素含量。
  2结果与分析
  正交试验结果分析,通过单因素试验确定了以浓度为60%的乙醇为提取溶剂,分别选取提取温度、提取时间、料液比为3个因素,每个因素采取3个水平,并以原花青素提取率为参考指标进行L933进行正交试验,正交试验因素水平表及正交试验结果分别见表1。
  表1原花青素提取工艺因素水平表
  水平因素提取温度(A)℃提取时间(B)min料液比(C)g/mL140401:6250501:7360601:8
  三个因素对原花青素提取率影响的主要顺序为:B>A>C,即提取时间>提取温度>料液比,且最佳组合为A3B2C1。即最佳组合为提取温度为60℃,提取时间为50min,料液比为1:6 。
  3结论
  通过单因素试验和正交试验得到最佳提取条件,即溶剂为乙醇(乙醇浓度为60%)、提取时间为50min、提取温度为60℃、料液比为1:6,此时,原花青素的提取率为3?24。
  参考文献
  [1]奚洪民,邹宪芝,刘进邦等.葡萄耔中低聚原花青素研究进展[J].化学世界,2004(12):759-762.
  [2]范明远,叶音.体内自由基清除剂及抗氧化剂-原花青素的研究进展[J].中国预防医学杂志.2001,2(04):303-305.
  [3]孙志广,赵万洲,陆茵.葡萄籽原花青素对鼠伤寒沙门氏菌的抗诱变作用[J].癌变畸变突变,2002,14(03):191-194.

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