论文投稿_医学论文投稿_核心期刊,职称论文投稿发表_论文部落

　　1.2实验动物

　　SD大鼠，雌雄各半，体重（240±20）克，清洁级，由哈尔滨医科大学附属肿瘤医院实验动物中心提供。

　　2原料处理

　　称取杜仲茶50克，粉碎，溶解在500毫升水中，温度60℃热回流提取30分钟。然后过滤，滤渣溶解在500毫升水中，温度60℃热回流提取30分钟。过滤后，将两次滤液混合在一起。用等体积正丁醇萃取3次，将3次萃取液混合。混合后的萃取液用旋转蒸发仪处理，温度60℃，每次时间不超过30分钟。将最后得到的固体样品冻干，保存待用。

　　3方法

　　3.1液相方法

　　安捷伦C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相组成是水和甲醇，比例为57%水和43%甲醇，流速1.0毫升/分钟，进样量10微克。

　　3.2质谱方法

　　质谱条件扫描方式采用负离子多离子反应监测模式MRM电压-4500伏，离子源雾化温度300℃，雾化气82.7千帕，气帘气68.9千帕。京尼平苷酸分子量373.2，碎片分子量211.1，DP电压-77伏，CE电压-18.5伏，CXP电压-10伏。桃叶珊瑚苷分子量345.2，碎片分子量182.9，DP电压-49伏，CE电压-13伏，CXP电压-2伏。芍药苷分子量479.3，碎片分子量121.1，DP电压-60伏，CE电压-22伏，CXP电压-8伏。

　　4制备及标准曲线的绘制

　　4.1标准品的制备

　　称取一定量的京尼平苷酸[1]和桃叶珊瑚苷用甲醇溶解，配成浓度为1毫克/毫升的混合标准品标准液。称取一定量的芍药苷，用甲醇溶解，配成浓度为100纳克/毫升的标准液。用200微克的空白血浆、100毫升的芍药苷标准液、100毫升的混合标准品标准液（经稀释），混合后使得混合标准品的浓度分别为0.192，0.96，4.8，24，120，600，3000纳克/毫升。涡旋30秒后12000转/分离心10分钟取上清液。

　　4.2血样的制备

　　血浆样品制备血样于12000转/分离心10分钟后取血浆200微克，加入100毫升的混合标准品溶液，100毫升芍药苷，涡旋30秒，12000转/分离心10分钟，取上清液进行血浆中京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的LC-MS/MS测定。

　　4.3标准曲线的绘制

　　用内标法绘制京尼平苷算和桃叶珊瑚苷[2]的标准曲线，芍药苷为内标。

　　5大鼠给药

　　大鼠以每克体重给药1毫克的给药量进行口服给药，取血时间为0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12，24h。根据标准曲线测出血样中京尼平苷酸和桃叶珊瑚苷的含量，绘制药时曲线。

　　6实验结果