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　　1.3.3 计算反应率 反应率=（1）
　　1.4 竹柳细胞壁综纤维素含量测定
　　称取约1.5 g细胞壁样品，于60 ℃烘至恒重W4，再转入250 mL碘量瓶中，加入150 mL 2 mol/L的HCl，105 ℃保温50 min，然后用去离子水冲洗过滤至滤液pH 6.5～7.0，接下来依次用体积分数95%的乙醇、无水乙醇、丙酮各洗涤2次，残渣转入已恒重的坩埚（W5）中，于60 ℃干燥箱中烘至恒重（W6）。将残渣转入150 mL烧杯中，加入15 mL预冷过的72%的硫酸水解3 h，然后加去离子水135 mL，室温过夜，残渣次日用去离子水冲洗过滤至滤液pH 6.5～7.0，滤渣转入已恒重的坩埚（W7）中，于60 ℃干燥箱中烘至恒重（W8）。按公式（2）、（3）、（4）计算半纤维素、纤维素和综纤维素含量，平行测定样品6份，取平均值[11，12]。
　　半纤维素含量=×100% （2）
　　纤维素含量=×100% （3）
　　综纤维素含量=半纤维素含量+纤维素含量（4）
　　1.5 竹柳细胞壁木质素含量测定
　　准确称量1 g（W9）细胞壁样品，加72%的硫酸15 mL，室温搅拌4 h，转入1 000 mL圆底烧瓶中，加560 mL去离子水稀释硫酸浓度至3%，加热回流2 h，再用砂芯漏斗过滤，收集滤液，残渣用热水洗涤至中性，转入已恒重的坩埚（W10）于105 ℃烘干至恒重，称量（W11）并按公式（5）计算酸不溶木质素含量，平行测定样品6份，取平均值[12，13]。
　　酸不溶木质素含量=×100% （5）
　　滤液在205 nm波长下测吸光度，如果吸光度大于0.7，则用3%的硫酸溶液稀释，当吸光度为0.2～0.7，按公式（6）和公式（7）计算，平行测定样品6份，取平均值。
　　B=×D （6）
　　酸溶木质素含量=×100% （7）
　　式中，B为滤液中酸溶木质素的含量（g/1 000 mL）；A为吸光度；D为样品滤液的稀释倍数；V为滤液总体积；110为吸光系数[L/（g·cm）]。
　　木质素含量=酸不溶木质素含量+酸溶木质素含量 （8）
　　2 结果与分析
　　2.1 DFRC法分析细胞壁成分
　　衍生化后的还原裂解（DFRC）法包括两个重要步骤：①细胞壁在溴乙酰和乙酸混合溶液中溶解，②锌粉催化还原裂解，在溴乙酰中植物细胞壁被溶解，酸性环境下细胞壁多糖进一步水解[14，15]，结合GC-MS通过查找数据库可以确定样品DFRC法获得的化合物组成，进一步解析样品细胞壁成分。通过计算反应率得出，大于95%的竹柳细胞壁参加了反应，所以试验中DFRC法产物包含了竹柳细胞壁的主要物质组成。
　　表1是竹柳细胞壁DFRC降解物气相色谱检测到的主要化合物保留时间、名称以及含量，除9和10是内标胆固醇及其乙酰化产物外，1～8是竹柳细胞壁DFRC法检测到的主要产物：D-木糖乙酸酯、L-阿拉伯糖乙酸酯、D-半乳糖乙酸酯、愈创木基乙酸酯、D-葡萄糖乙酸酯、紫丁香基乙酸酯、L-岩藻糖乙酸酯和D-纤维二糖乙酸酯。根据构成综纤维素和木质素的单体类型可知，竹柳细胞壁综纤维素单体主要是D-木糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、L-岩藻糖和D-纤维二糖，木质素的单体主要是G型和S型，没有检测到H型单体。不计算内标的情况下，综纤维素和木质素的含量分别为80.16%和19.84%。
　　2.2 竹柳细胞壁综纤维素和木质素含量分析
　　半纤维素是戊糖、己糖和糖酸所组成的不均一聚糖，易水解，高温下经稀酸处理几乎可以把半纤维素全部水解成可溶性糖；纤维素是β-1，4糖苷键组成的长链分子，长链分子进一步形成一种具有高度结晶区的超分子稳定结构，该结构可以被浓酸溶解，在溶解过程中导致纤维素的均相水解[1]，因此依次用盐酸、硫酸水解竹柳，准确称量水解前后的重量并计算差重可以得出半纤维素、纤维素以及综纤维素含量。采用Klason法和紫外分光法分别测定酸不溶木质素和酸溶木质素含量，试验没有检测植物含有的少量矿质元素，结果见表2。从表2可知，综纤维素含量为79.03%，木质素含量为20.35%，对比DFRC法测定的糖类和木质素类含量，可以得出两种方法测得的结果基本一致，说明DFRC法检测出的竹柳细胞壁各成分含量可靠。