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　　[摘要] 目的 建立机械通气相关性肺损伤大鼠模型并进行评价，确定建立机械通气相关性肺损伤大鼠模型的最适通气条件。 方法 选取成年雄性SD大鼠72只，体重250～300 g，随机分为A、B、C、D组（n=18）：对照组（A 组，自主呼吸组），小潮气量（VT）组（B组，VT=6 ml/kg），常规VT组（C组，VT=10 ml/kg），大VT组（D组，VT=40 ml/kg），各组按机械通气时间（2、4、6 h）再随机分为3个亚组（n=6）。A组仅作气管切开插管，其余各组气管切开后接小动物呼吸机行机械通气，呼吸机参数均设置为RR 70/min，FiO2 21%，PEEP 0 cmH2O。机械通气结束后处死大鼠，剖胸取右肺组织计算湿重干重比（W/D），计算细胞凋亡指数，HE染色后光镜下观察肺组织病理学结果，并进行肺损伤评分。比较不同VT及通气时间条件下大鼠的肺损伤情况。 结果 与A、B、C组比较，D组通气2 h时开始出现肺损伤病理学表现，通气4 h时肺损伤评分、肺组织W/D和细胞凋亡指数均升高，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 给予大鼠40 ml/kg VT通气4 h可以成功建立机械通气相关性肺损伤模型。
　　[关键词] 机械通气相关性肺损伤；机械通气；动物模型；大鼠
　　[中图分类号] R332 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）02（c）-0011-04
　　[Abstract] Objective To establish and evaluate the rat model of ventilator-induced lung injury，and to determine the best ventilation condition of rat model of ventilator-induced lung injury. Methods 72 adult male SD rat were selected，weight was 250-300 g，and they were randomly divided into group A，B，C and D （n=18）.Control group （group A，spontaneous breathing group），low tidal volume group （group B，VT=6 ml/kg），routine tidal volume group （group C，VT=10 ml/kg） and high tidal volume group （group D，VT=40 ml/kg）.Each group was divided into 3 subgroups （n=6） according to duration of mechanical ventilation （2 h，4 h and 6 h）.group A was only given tracheotomy tube，the others were given small animal breathing machine to conduct mechanical ventilation after tracheotomy.The parameter of breathing machine was set as RR 70/min，FiO2 was 21%，PEEP was 0 cmH2O.The rat were sacrificed after the end of mechanical ventilation，W/D of right lung tissue taken by splitting chest was counted and cell apoptosis index was counted.The pathology results of lung tissue were observed under light microscope after HE staining.The score of lung damage was valued.Lung damage of rat at different tidal volume and duration of ventilation was compared. Results Compared with group A，B and C，lung damage pathology feature appeared after 2 h ventilation in group D and all of the lung damage score，W/D of lung tissue and cell apoptosis index was increased respectively，and the difference was statistical significance （P<0.05）. Conclusion Rat is given 40 ml/kg of tidal volume and ventilation for 4 h can establish the model of ventilator-induced lung injury successfully.
　　[Key words] Ventilator-induced lung injury；Mechanical ventilation；Animal model；Rat
　　机械通气（mechanical ventilation，MV）在危重患者的救治和麻醉维持过程中起重要作用，然而MV使用不当本身可以诱发严重肺损伤[1]。MV过程中较高的潮气量（VT）可以损害肺泡-毛细血管黏膜屏障，破坏肺组织内皮细胞和上皮细胞增加其通透性[2]，同时机械刺激导致肺泡内炎症细胞募集活化并释放炎症介质和细胞因子从而引起肺损伤[3]。目前，国内外肺损伤动物模型制备多选择鼠类、兔类、犬类、绵羊等动物，其中鼠类具有经济性、细胞生物学角色的可用性等优点使其在肺损伤模型建立研究中运用较多[4-5]。本研究主要比较不同VT及通气时间条件下大鼠的肺损伤情况，确定建立MV所致肺损伤大鼠模型的最适通气条件。
　　1 材料与方法
　　1.1 实验动物
　　选取健康的成年清洁级雄性SD大鼠72只，体重250～300 g，由北京海淀兴旺动物养殖场提供。
　　1.2 仪器与试剂
　　HX-300动物呼吸机（成都，泰盟）；动物天平-YB102（中国，海康）；电热鼓风干燥箱（上海，精宏）；细胞凋亡检测试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）；戊巴比妥（西安沃尔森生物技术有限公司）。
　　1.3 方法
　　1.3.1 动物准备 用2%戊巴比妥钠（50 mg/kg）溶液进行腹腔注射麻醉，待麻醉起效后给予称重、固定架体位固定。颈部皮肤备皮、碘伏消毒，用手术刀沿气管长轴切约1.0 cm皮肤切口，同时用止血钳钝性分离切口下皮肤组织和肌肉，暴露大鼠气管。将自制14G气管导管缓慢刺入气管向前推进1.0 cm、拔出管芯，通气确定在主气管内手术缝线固定套管后接小动物呼吸机行MV，四肢连接生物机能监护仪持续进行心电图监测。行尾静脉穿刺保持静脉通畅；整个过程中维持室温26～28℃。实验中按大鼠出血量和生理需要量维持输液[1 ml/（kg·h）生理盐水][6]。
　　1.3.2 动物分组 将大鼠随机分为A、B、C、D组（n=18），予以不同VT和通气时间。对照组（A 组，自主呼吸组），小VT组（B组，VT=6 ml/kg），常规VT组（C组，VT=10 ml/kg），大VT组（D组，VT=40 ml/kg），每组18只，各组分别按通气时间（2、4、6 h）再随机分为3个亚组，每个亚组各 6 只大鼠。A组仅作气管切开插管，其余各组气管切开后接小动物呼吸机行MV，B、C、D组呼吸机参数均设置为RR 70/min，FiO2 21%，PEEP 0 cmH2O。
　　1.4 检测指标
　　实验中观察心电图，通气结束即刻处死动物。剖胸取右侧肺组织计算湿重干重比（W/D），另一侧肺做病理学及细胞学凋亡检测。
　　1.4.1 血流动力学指标 连续观察心电图变化、心率。
　　1.4.2 肺组织 W/D 取大鼠右肺组织，先称湿重，再放置于电热鼓风干燥箱中，干燥箱温度设定为80℃，恒温烘烤直到肺组织至恒重后称肺干重，然后计算肺组织 W/D。
　　1.4.3 肺组织病理学检查 取部分左肺组织用4%多聚甲醛溶液固定，经过石蜡包埋、切片、HE染色等处理后，置于光学显微镜下观察肺泡及毛细血管充血、肺内出血、中性粒细胞在血管壁及肺间隙浸润、肺泡壁增厚或者透明膜形成以上四项进行肺损伤评分。采用3分制计分：无改变0分，轻度改变1分，中度改变2分，重度改变3分，然后累计总分。每个标本选取5个高倍视野，评分后取其均值。
　　1.4.4 TUNEL法检测肺组织细胞凋亡程度 经过TUNEL染色的肺组织细胞若细胞核内出现棕黄色颗粒即为阳性结果，置于高倍镜下（×400）随机选取5个不重复视野，计数100个细胞中TUNEL阳性细胞数，计算细胞凋亡指数。