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　　2.2内细胞团的分离方法
　　第一株人胚胎干细胞的分离过程中，使用了动物抗人抗体及动物血清等动物源性的成分，由于这些动物源性成分可能对人胚胎干细胞造成潜在的污染，使得用这种方法建立起来的人胚胎干细胞株在后期的应用中存在风险。利用机械法直接分离囊胚的透明带以及滋养层细胞来获取ICM或用酶消化的方法去除透明带从而分离ICM，在一定程度上避免了ICM与动物源性成分的直接接触，从未来的使用方面来说是比较理想的分离1CM的办法。此外，通过利用激光束在透明带上打孔，在显微镜下，利用固定针固定囊胚，用活检针将囊胚从透明带中取出，之后，直接将取出的囊胚在培养皿中培养，或再利用激光束将ICM与滋养层细胞进一步分离，再在培养皿中培养，这种方法也是一种可行的方法。也有学者采用将单卵裂球与已经建成的干细胞共培养的方法来获得胚胎干细胞，但这种方法建株的效率不高。
　　3饲养层细胞的发展与无饲养层细胞培养条件
　　3.1饲养层细胞
　　传统的方法使用MEF作为饲养层细胞来维持胚胎干细胞的生长，但是由于潜在污染的问题，MEF并不是最理想的滋养层细胞。有研究者指出，MEF能够为胚胎干细胞提供更多的增殖空间，而HFF（humanforeskinfibroblast，HFF）分泌的生长因子能够更好的促进胚胎干细胞的生长，鉴于这个特点，以期能更好的支持胚胎干细胞的生长，人们使用小鼠成纤维细胞跟人包皮成纤维细胞按比例混合而成的混合饲养层细胞来培养hESC，相对利用单一的饲养层细胞相比较来说，生长在单一的饲养层细胞上的人胚胎干细胞克隆扁平、较薄，而生长在混合饲养层上的人胚胎干细胞克隆饱满、厚实，其克隆形态显著好于单一饲养层，但是这种方法并没有避免异源性物质的污染问题。为了找寻非动物源性的饲养层细胞，人们采用了处于不同发育阶段的不同组织来源的人体细胞作为MEF的替代品，如：人类包皮成纤维细胞、胎盘细胞、子宫内膜细胞、成人骨髓基质细胞、胎儿肌肉细胞、胎儿皮肤细胞。尽管不同的细胞取得的效果不同，但都能使干细胞保持未分化的状态。此外，胚胎干细胞自身分化所形成的成纤维细胞样细胞也能成为一个自体的饲养层细胞来源。由此得到的饲养层细胞，具有特异性，避免了动物源性成分或异源性成分对于胚胎干细胞的污染。