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　　【摘要】目的：观察金荞麦药酒对胶原诱导关节炎大鼠模型血清和滑膜细胞IL-22、IL-18、TNF-α的影响。方法：将Wistar大鼠随机分成6组，空白组、模型对照组、金荞麦高剂量组、金荞麦中剂量组、金荞麦低剂量组、雷公藤多苷组，建立Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型，检测血清和滑膜细胞IL-22、IL-18、TNF-α的含量。结果：与空白组比较，模型对照组血清和滑膜细胞IL-22、IL-18、TNF-α明显升高；与模型组比较，各给药组的上述指标均得到改善。结论：金荞麦药酒治疗类风湿关节炎的机制可能与降低IL-22、IL-18、TNF-α有关。 

　　【关键词】金荞麦药酒；胶原诱导关节炎；白细胞介素-22；白细胞介素-18；肿瘤坏死因子-α 

　　金荞麦别名苦荞麦、荞麦当归、荞麦三七、金锁银开、贼骨头、铁拳头、土茯苓等；其性凉，味辛、苦，具有清热解毒、活血化瘀、健脾利湿的作用。金荞麦药酒在民间用于治疗类风湿关节炎（RA）效果明显，课题组前期研究也证明金荞麦药酒具有明显的镇痛抗炎作用[1]，但尚未见关于抗RA作用的研究。实验旨在研究金荞麦药酒对Ⅱ型胶原诱导关节炎模型（CIA）大鼠血清和滑膜细胞IL-22、IL-18、TNF-α的影响，探讨其抗RA免疫作用机制，为金荞麦应用于RA提供理论依据。 

　　1仪器与材料 

　　11药物雷公藤多苷片（批号：20131114，浙江得恩德制药有限公司）；金荞麦药酒，以金荞麦根茎及块根计，每毫升药酒相当于04g原药材，本院自制。 

　　12动物Wistar大鼠60只，体重（200±20）g，SPF级，雌雄各半，合格证号：SCXK（鄂）2011-0012，由三峡大学实验动物中心提供。 

　　13试剂完全弗氏佐剂（FCA）、鸡Ⅱ型胶原（CⅡ）由sigma 公司提供；白细胞介素-22（IL-22）、白细胞介素-18（IL-18）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）测定试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供。 

　　14仪器UV754紫外可见分光光度计（上海佑科仪器仪表有限公司）；台式冷冻离心机（上海安亭科学仪器公司）。 

　　2方法 

　　21动物造模及分组给药随机抽取10只大鼠，为空白组，其余50只建立Ⅱ型胶原诱导关节炎模型[2-3]。用02%醋酸将CⅡ溶解，使其浓度为2mg/ml，放置过夜（4℃条件下），与FCA按1∶1比例混合，在冰浴中乳化，得到CⅡ乳剂，对每只大鼠右后肢足趾、背部及尾根部3点皮内共注射04ml，在相同部位3点对空白组注射生理盐水01ml。所有造模大鼠7d后加强免疫1次，即按原方法注射CⅡ乳剂02ml。将造模大鼠随机分为5组，即模型对照组、金荞麦高剂量组、金荞麦中剂量组、金荞麦低剂量组、雷公藤多苷组。空白组，模型对照组于造模后给予生理盐水15ml/（kg·d），雷公藤多苷组给予雷公藤多苷片003g/（kg·d），金荞麦高、中、低剂量组分别给予金荞麦药酒540、270、135ml /（kg·d），相当于原生药216、108、054g/（kg·d），连续给药21d。 

　　22血清TNF-α、IL-22、IL-18的测定末次给药2h后，将大鼠用3%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉，固定，腹总动脉取血，离心，制备血清，按试剂盒说明测定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。 

　　23滑膜细胞TNF-α、IL-22、IL-18的测定取大鼠后肢右膝关节，分离出滑膜，剪碎，用生理盐水1∶20匀浆，按试剂盒说明测定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。 

　　24统计学处理数据采用SPSS 170软件进行统计处理，数据采用均数±标准差（x±s）表示，采用用t检验，P<005表示差异有统计学意义。 

　　3结果 

　　31对血清TNF-α、IL-22、IL-18的影响与空白组比较，模型对照组小鼠血清TNF-α、IL-22、IL-18含量升高，差异有统计学意义（P<001）；雷公藤多苷组和金荞麦药酒各剂量组与模型组相比，血清TNF-α、IL-22、IL-18含量降低，除低剂量组IL-22无明显差异外，其他组别和指标差异有统计学意义（P<005或P<001）。见表1。 

　　3讨论 

　　RA是一种以关节滑膜炎症为主要表现的自身免疫性疾病。研究表明，NK细胞在RA发病过程中发挥重要作用[4]，NK-22细胞是不同表型的NK细胞之一，RA患者血液和滑液中NK-22细胞明显高于正常人[5]。IL-22是NK-22细胞分泌的细胞因子之一，能促进类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖，是促成纤维样滑膜细胞增生的细胞因子[6]，在RA的病理过程中发挥重要作用。IL-18作为一种新型IL家族促炎细胞因子，主要与IL-18受体结合发挥效应。实验表明，RA患者血清IL-18明显升高，其水平与病情呈正相关[7]，提示IL-18参与RA病情的活动，其作用与促进T细胞增殖和NK细胞的细胞毒作用，诱导以Th1细胞为主的细胞免疫反应，使病变组织 Th1/Th2比例失衡有关[8]。TNF-α是一种免疫调节和前炎性因子，在病变关节中可促进前列腺素E2（PGE2）等多种炎症介质释放，引起关节软骨的吸收破坏，促进成纤维细胞的增生；且TNF-α常与IL-1β一起合成与释放，是致病机制中一对重要的促炎症细胞因子，参与了RA发生、发展的全过程。 

　　在RA患者病变关节滑膜内，巨噬细胞数量明显增多，其不仅与关节疼痛数、压痛数、血沉、C 反应蛋白等反应RA病情程度的指标呈明显的正相关，还与X线关节破坏的侵蚀积分和狭窄积分呈明显的正相关[9]，可能与其释放IL-22、IL-18、TNF-α等炎性因子有关。 

　　本实验研究表明，金荞麦药酒对CIA大鼠免疫功能有明显影响，可降低血清和滑膜细胞IL-22、IL-18、TNF-α含量，这些可能是其治RA的作用机制之一。 

　　参考文献 

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　　[9] 戴冽，汤美安，尹培达，等. 滑膜巨噬细胞与类风湿关节炎病情活动及关节破坏的相关性[J].中华风湿病学杂志，1999，3（4）：229-231.