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　　利用L9（34）正交表安排实验，按6倍处方量称取鸡血藤、花生红衣药材粗粉适量，以最佳水煎煮提取工艺提取后，过滤，合并滤液，浓缩成规定相对密度（30℃）的稠膏，精密称定重量。然后将稠膏分成四份，精密称定重量，其中一份用水稀释定容于100ml容量瓶，用于测定该次最佳水煎煮提取实验儿茶素和总黄酮的含量；另外三份精密测定体积，然后加乙醇至规定的含醇量，静置规定的时间，过滤，定容于100ml容量瓶，用于测定醇沉后的儿茶素、总黄酮含量和浸膏得率。儿茶素和总黄酮含量的测定：精密量取样品液5ml，置蒸发皿中水浴蒸干，按照“2.1.3”和“2.2.2”项下方法测定。根据醇沉前后儿茶素、总黄酮含量的变化，计算醇沉后儿茶素、总黄酮的转移率。
    醇沉后儿茶素转移率=醇沉后儿茶素的含量/该次水煎煮提取实验儿茶素含量×100%
　　醇沉后总黄酮转移率=醇沉后总黄酮的含量/该次水煎煮提取实验总黄酮含量×100%
　　2.5 实验结果及分析
　　2.5.1 水煎煮提取各次正交实验结果及方差分析 见表3、表4。
　　由表3可知，水煎煮提取实验各因素对儿茶素提取率的影响大小为C>B>A，最佳工艺条件为A1B3C3；对总黄酮提取率的影响大小为C>A>B，最佳工艺条件为A3B1C3。表4方差分析的结果表明，A、B两个因素对儿茶素、总黄酮提取率的影响无统计学意义，而C因素对儿茶素、总黄酮提取率的影响有统计学意义。由于水煎煮提取的目标主要是具有刺激造血祖细胞增殖作用的儿茶素，故以儿茶素含量权重为60%，总黄酮含量权重为40%进行加权综合评分，由综合评分的极差分析可知，各因素对综合评分的影响大小为C>B>A，最佳工艺条件为A3B3C3；方差分析表明A、B两因素对综合评分的影响无统计学意义，而C因素对综合评分的影响有统计学意义。因此选择水煎煮提取的最佳工艺条件为A3B3C3，即加水量为12倍，煎煮时间为1.5h，煎煮次数为3次。
　　按照最佳水煎煮提取工艺条件进行3次验证性实验，儿茶素平均含量为1.0204mg/g，总黄酮平均含量为77.9289mg/g，证明该工艺条件是稳定、可行的。
　　2.5.2 醇沉各次正交实验结果及方差分析 见表5、表6。
　　由表5可知，醇沉实验各因素对儿茶素转移率的影响大小为A>B>C，最佳工艺条件为A2B3C2；对总黄酮转移率的影响大小为B>C>A，最佳工艺条件为A2B3C3；对浸膏得率的影响大小为A>C>B，最佳工艺条件为A3B1C1。表6方差分析的结果表明，A、B、C三个因素对儿茶素的转移率的影响有统计学意义，而对总黄酮转移率、浸膏得率的影响没有统计学意义。由于醇沉的目标主要是在保留儿茶素、黄酮等有效成分的基础上除杂，故以儿茶素转移率权重为50%，总黄酮转移率权重为30%，浸膏得率权重为20%进行加权综合评分（由于浸膏得率与醇沉纯化效果成反比关系，故以浸膏得率倒数进行评分），由综合评分的极差分析可知，各因素对综合评分的影响大小为B>A>C，最佳工艺条件为A2B3C3；方差分析表明A、B、C三个因素对综合评分的影响均有统计学意义。因此选择醇沉的最佳工艺条件为A2B3C3，即浓缩液相对密度为1.10～1.15g/ml，含醇量为70%，静置时间为36h。按照最佳醇沉工艺条件进行3次验证性实验，儿茶素转移率平均为78.54%，总黄酮转移率平均为87.89%，浸膏得率平均为0.1471g/g，证明该工艺条件是稳定、可行的。
    3 讨论
　　进行醇沉工艺研究时，将最佳水煎煮提取后的样品浓缩到规定的相对密度后进行醇沉，因此醇沉后的儿茶素、总黄酮的含量与醇沉前样品中的儿茶素、总黄酮含量直接相关。由于各次最佳水煎煮提取的样品中儿茶素、总黄酮的含量并不相同，最佳水煎煮提取的样品中儿茶素、总黄酮的含量偏高者，醇沉后儿茶素、总黄酮含量也会相应偏高，如果直接以醇沉后儿茶素、总黄酮的含量作为醇沉工艺条件的考查指标，可能带来较大的误差。因此，对最佳水煎煮提取的样品抽样测定其儿茶素、总黄酮的含量，再对醇沉后的样品测定儿茶素、总黄酮含量，根据醇沉前后儿茶素、总黄酮含量的变化，计算醇沉后儿茶素、总黄酮的转移率，作为考查醇沉工艺条件的指标，可以避免各次最佳水煎煮提取样品中儿茶素、总黄酮的含量不一致而带来的误差。
　　采用络合-分光光度法测定各次正交实验样品中总黄酮含量，其实验原理是黄酮类物质在碱性与亚硝酸根存在的环境下与铝离子形成稳定的红色络合物，但我们在制备供试品过程中发现有红色沉淀产生，造成测定结果不稳定。该现象与样品中原花色素类物质在碱性条件下形成沉淀，并与铝离子形成络合物有关[7]，因此根据文献采取了增加硝酸铝试液剂量，并过滤除去沉淀的办法，较好地解决了该问题。
　　参考文献
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