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　　摘要：目的 探讨补阳还五汤精简方对缺血性脑损伤的保护作用。方法 采用大脑中动脉线栓法建立大脑中动脉闭塞模型，实验大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和补阳还五汤精简方高、中、低剂量组，各给药组给予相应药物灌胃，模型组和假手术组给予等容积无菌蒸馏水，连续7 d。运用Matlab软件编程分析数据，观察各组大鼠神经功能、体质量、脑梗死面积和脑干湿重的变化。结果 脑缺血后大鼠出现大面积脑梗死、脑组织水肿和神经功能障碍。与模型组比较，补阳还五汤精简方中、低剂量组均能改善模型大鼠的各项指标，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 补阳还五汤精简方对脑缺血损伤具有保护作用，给药量以中剂量最佳。

　　关键词：补阳还五汤精简方；脑缺血；神经功能；脑梗死面积；大鼠

　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）10-0054-04

　　脑缺血卒中是最常见的脑血管疾病，约占脑血管病的75%～90%[1-2]。补阳还五汤出自清代著名医家王清任《医林改错》，是治疗缺血性脑损伤的经典名方，能有效抑制神经细胞凋亡，减少脑缺血后的炎症反应，降低患者的致残率和病死率[3-4]。近年来研究表明，补阳还五汤具有抑制脑水肿、缩小脑梗死面积等抗脑缺血作用[5]。本课题组遵循补阳还五汤之方义，结合临床经验，应用黄芪、川芎和地龙三味药组成补阳还五汤精简方。方中重用黄芪，意在大补脾胃元气，令气旺以促血行；川芎具有祛瘀活血的功效，能熄风开瘀，改善微循环和血流瘀滞状态；地龙加强通络功效，发挥抗炎、抗损伤作用。本实验主要观察补阳还五汤精简方对大鼠脑缺血后神经功能、体质量、脑梗死面积和脑干湿重的影响，探讨其对缺血性脑损伤的保护作用。

　　1 实验材料

　　1.1 动物

　　SPF级SD大鼠60只，体质量250～280 g，雄性，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物合格证号：SCXK（京）2012-0001。

　　1.2 药物、试剂与仪器

　　补阳还五汤（黄芪120 g，当归6 g，赤芍4.5 g，川芎3 g，红花3 g，桃仁3 g，地龙3 g）及其精简方（黄芪30 g，川芎9 g，地龙6 g）干浸膏均由湖南中医研究院中药所张水寒教授提供。补阳还五汤按传统水煎法浓缩干燥后制备成干浸膏，相当于含4.5 g原药材/g。红四氮唑，英国BIOFER公司，批号20110728；水合氯醛，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20111114。Image-Pro Express图像分析系统（日本Olympus公司），恒温水浴箱（重庆仪器厂），TP-1000电子天平（中国湘仪天平仪器厂），FNl01-2型鼓风干燥箱（长沙仪器仪表厂）。

　　2 实验方法

　　2.1 分组与给药

　　按照实验设计方案，对实验大鼠编号和称重，并做数据记录。以体质量为主要因素，将大鼠分成5组，从各组中随机选取2只大鼠组成假手术组，剩余50只大鼠以备造模。造模后，结合神经功能评分的情况，随机从5组数据中选取2只大鼠组成模型组、补阳还五汤组和补阳还五汤精简方高、中、低剂量组。通过以上实验分组设计，共形成6组大鼠，每组10只。按照人鼠体表面积折算等效比率计算出适用于大鼠的剂量。术前模型组和假手术组均给予等容积无菌蒸馏水，自由饮食、活动；术后每日分别按补阳还五汤（3.15 g/kg）和补阳还五汤精简方高（3.44 g/kg）、中（2.41 g/kg）、低（1.68 g/kg）剂量灌胃给药，给药容积为0.05 mL/kg。

　　2.2 造模

　　采用大脑中动脉线栓法，经左侧颈外-颈内动脉插线，建立大脑中动脉闭塞（MCAO）模型[6-7]。室温保持在20～30 ℃，手术时使用加热垫。术后将动物置于放有清洁垫料的饲养盒内，自由饮水、进食。

　　2.3 数据采集

　　按照预设的药效检测指标，采集假手术组、模型组、补阳还五汤组和补阳还五组精简方高、中、低剂量组大鼠神经功能评分、体质量、脑梗死面积和脑干湿重的相关数据。其中包括各组大鼠手术后2 h和经药物干预7 d后神经功能评分的值，术后补阳还五汤组、模型组和补阳还五汤精简方高、中、低剂量组5组大鼠的脑梗死面积比值（造模后假手术组未出现梗死灶），大鼠治疗7 d后大鼠脑组织干湿重比值，大鼠给药后1～7 d的体质量。

　　2.4 数据预处理

　　按照实验目标和需求进行数据预处理，剔除实验数据中的异常值。鉴于所得数据为小样本，故选用肖维勒准则进行处理。首先计算测定值的残差Vd=xd-—x（1≤d≤n），将不满足计算公式的数据视为异常数据，予以剔除。计算公式如下：|Vd|≥Wn×S。

　　收集整理神经功能评分、体质量、脑梗死面积比和脑干湿重比的数据，运用Excel软件对各组数据进行预处理，结果保存备用。

　　3 统计学方法

　　结合卡方拟合优度检验和两组独立样本t检验法，采用科学计算工具Matlab2010b编程分析各组数据，以检验各组数据的正态性和方差是否相等为基本条件。P<0.05表示差异有统计学意义。

　　4 结果

　　4.1 补阳还五汤精简方对大鼠神经功能评分的影响

　　除假手术组外，其余各组大鼠均存在较大程度的神经功能障碍，与假手术组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。给药干预7 d后，各组大鼠神经功能均有所改善，补阳还五汤精简方中、低剂量组神经功能评分值变化较为明显，与模型组比较，差异有统计学意义（P<0.05），给药组中神经功能恢复程度以中剂量组最佳。结果见表1。

　　4.2 补阳还五汤精简方对大鼠体质量的影响

　　造模后，假手术组大鼠体质量变化趋势不明显，模型组大鼠体质量呈现小幅震荡上升趋势；补阳还五汤组、补阳还五汤精简方中剂量组在给药后第4日大鼠体质量均呈现显著上升趋势。结果显示，假手术组、补阳还五汤精简方中剂量组大鼠的体质量恢复情况明显好于模型组。结果见图1。

　　4.3 补阳还五汤精简方对大鼠脑梗死面积的影响

　　假手术组脑组织呈现深红色，模型组、补阳还五汤组和补阳还五汤精简方高、中、低剂量组大脑左侧皮层均有不同程度的苍白色坏死组织区，即梗死损伤灶。运用Matlab2010b编程分析各组数据，发现均服从正态分布。使用独立样本t检验的方法，检测两两样本之间差异是否有统计学意义。结果表明，药物干预组脑梗死灶面积明显低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）；补阳还五汤精简方中剂量组与原方比较，差异无统计学意义（P>0.05）；假手术组与补阳还五汤中剂量组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；补阳还五汤精简方中、低剂量组之间比较差异无统计学意义（P>0.05），但中剂量比低剂量疗效好，见表2。

　　4.4 补阳还五汤精简方对大鼠脑干湿重比的影响

　　药物干预组与模型组比较，脑干湿重比值存在显著差异。给药7 d后，依次将补阳还五汤精简方中、低剂量组和补阳还五汤组与模型组比较，脑干湿重比值组间差异明显（P<0.05）；补阳还五汤精简方中剂量组与补阳还五汤组比较，差异无统计学意义（P>0.05），两组分别与假手术组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。补阳还五汤精简方中、低剂量和补阳还五汤均能在一定程度上降低脑组织的水肿程度，且中剂量为最佳剂量，见表3。

　　5 讨论

　　局灶性脑缺血可称为缺血性脑卒中，是脑血管疾病中最为常见的临床类型。它是脑血液供应障碍引起脑组织缺血、缺氧所致，相应区域脑梗死性坏死，大量神经元丧失，产生神经功能缺损的症状和体征。近年来，国内外学者在补阳还五汤及其拆方抗脑缺血的实验、临床方面作了大量研究，表明补阳还五汤及其拆方在调控脑缺血方面有较好疗效[8]，符合中医辨证治疗的要求，是临床防治缺血性脑血管疾病引起的中风及中风后遗症的常用方剂，能有效体现气虚血瘀理论。方中黄芪不仅能够提高超氧化物歧化酶的活性，降低脂质过氧化物的含量，还能降低血小板黏附率，减少血栓的概率，增进末梢血液循环、增强机体免疫力；川芎能活血行气，祛风止痛，抑制细胞凋亡；地龙具有溶栓抗凝、降压等作用，可以通过减轻缺血性脑卒中症状，达到抗惊厥、镇静、抗炎、抗损伤的作用。基于此方义，应用黄芪、川芎和地龙3味药组成的补阳还五汤精简方对缺血性脑损伤具有保护作用。

　　本研究按照科学的实验设计方法，采用肖维勒准则对实验数据进行预处理，剔除异常值，结合卡方拟合优度检验和两组独立样本t检验法，运用Matlab编程比较在SD大鼠MCAO模型中模型组、假手术组、补阳还五汤组和补阳还五汤精简方高、中、低剂量组体质量、脑梗死面积、脑干湿重比等指标的差异性，结果表明补阳还五汤精简方中、低剂量组与模型组的体质量、脑梗死面积和脑干湿重比存在差异（P<0.05），且中剂量组对脑缺血的治疗效果最佳，其疗效优于补阳还五汤组（正常人体剂量），能有效改善模型大鼠的神经功能症状，减小脑梗死面积和脑组织水肿，对脑缺血损伤具有保护作用。

　　从现有药效学实验研究的文献来看，通常学者围绕研究目的设计实验方案，拟定相关的药效指标和实验分组，运用假设检验等统计学方法分析小样本药效实验的数据，作为支撑实验结论的依据。这种方法所得到的数据不仅样本量小，且受到动物批次、动物体质量、温度、湿度和设备等客观因素影响，不能重复使用。一方面加大了实验设备和动物的消耗，另一方面制约了药效学实验的深入研究。笔者认为可以从药学信息数据元着手，制定相关的实验数据录入标准，为后续构建药效学实验数据分析和共享平台奠定基础，以顺应大数据环境下的药学信息化的发展。

　　参考文献：

　　[1] 刘柏炎，沈剑刚，蔡光先，等.补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠脑内caveolin 1、2的影响[J].湖南中医药大学学报，2008，28（1）：22-24，28.

　　[2] 唐映红，邓常青，刘旺华，等.补阳还五汤4类有效部位对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积的影响[J].中草药，2005，36（2）：236-239.

　　[3] 夏相宜，王宇红，蔡光先，等.脑健胶囊对MCAO大鼠脑水肿、梗死面积及体质量的影响[J].中医学报，2014，29（4）：532-534.

　　[4] 谢渊.补阳还五汤加减法治疗气虚血瘀型脑梗死疗效观察[J].实用心脑肺血管病杂志，2012，20（5）：913-914.