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　　[摘要]目的 建立齿囊耙齿菌固体发酵产物中麦角甾醇含量的测定方法。 方法 采用高效液相色谱方法，汉邦ODS-C18色谱分析柱（250×4.6mm，5?m），流动相为100% 甲醇，流速1.0mL/min，检测波长282nm；柱温30℃。 结果 麦角甾醇进样量在0.20～1.40μg之间与吸收峰面积呈良好的线性关系，r=0.9999；平均加样回收率为100.07%，RSD（%）=1.91%。方法具有较高的专属性、准确性、重现性和可行性。教育论文结论 该方法简便、准确、灵敏度好，为齿囊耙齿菌固体发酵产物质量评价提供了可靠依据。 

　　[关键词]齿囊耙齿菌固体发酵产物；麦角甾醇；高效液相色谱 

　　[中图分类号] R284.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2015）01-89-03 

　　[Abstract] Objective To establish a method for determination of ergosterol content in irpex lacteus sac fungi solid fermentation products. Methods Using high performance liquid chromatography， Hanbond ODS-C18 column chromatography （250×4.6mm， 5μm）， the mobile phase of 100% methanol， flow rate was 1.0mL/ min， detection wavelength was 282nm； column temperature was 30℃. Results The injection volume of ergosterol was between 0.20-1.40μg absorption peak area， showed a good linear relationship， r=0.9999； the average recovery was 100.07%， RSD（%）=1.91%. The method had a high specificity， accuracy， reproducibility and feasibility. Conclusion The method is simple， accurate， sensitive， good， it provides a reliable basis for quality evaluation of irpex lacteus sac fungi solid fermentation product. 

　　[Key words] Irpex lacteus sac fungi solid fermentation products； Ergosterol； HPLC 

　　我国食药用真菌资源丰富且使用历史悠久，在民间和临床都有较为广泛的应用，其开发与利用的潜力巨大。齿囊耙齿菌Irpex hydnoides Y.W.Lim & H.S.Jung [1] 隶属于非菌目多孔菌科耙齿菌属真菌，民间用来治疗肾小球肾炎和痛风等疾病。主要分布于吉林省长白山区 [2]。 

　　齿囊耙齿菌固体发酵产物是齿囊耙齿菌丝体与薏苡米双向发酵的产物。薏苡米仁别名米仁、六谷、川谷、菩提子，来源为禾本科植物薏苡的种仁。临床可治疗多种恶性肿瘤，多配入复方使用，在辨病与辨证相结合的基础上，与其他抗肿瘤药组成复方应用[3]；还可治疗肥胖症、急性咽喉炎、皮肤科疾病[4]等。齿囊耙齿菌自然界中存量较少，故采用生物工程固体双向发酵技术，以薏苡仁为培养基得到齿囊耙齿菌发酵代谢产物，替代野生的齿囊耙齿菌 

　　子实体作为药用。可以有效的解决菌体野生资源匮乏，液体培养成本较高等诸多开发利用上的瓶颈问题。对食药用真菌生物资源合理有效的利用以及开发开辟了新的道路。 

　　1 实验材料 

　　1.1 药物与试剂 

　　齿囊耙齿菌固体发酵产物由长春中医药大学药用真菌研究室提供。麦角甾醇对照品（上海田源生物技术有限公司）；甲醇为色谱醇（美国Fisher公司）。 

　　1.2 仪器 

　　LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）。AUY220精密电子天平，（日本岛津公司生产），TGL16M台式高速冷冻离机（湖南凯大科学仪器有限公司）。 

　　2 方法与结果 

　　2.1 对照品溶液的制备 

　　2.2 供试品溶液的制备 

　　精密称取齿囊耙齿菌固体发酵物2g，加入10mL甲醇，用封口膜封口，称重。超声提取30min，再次称重，加入甲醇至提取前重量。2500r/min离心15min，取上清液，用0.45μm脂溶性滤膜过滤，即得供试品样。 

　　2.3 色谱条件[5-10] 

　　汉邦ODS-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇，流速1.0mL/min，检测波长282nm，柱温30℃，进样量10μL，理论塔板数以对照品峰计不得少于3000。 

　　2.4 方法学考察 

　　2.4.1 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液2， 6，10，12，14μL，分别注入液相色谱仪，测定吸收峰面积。分别为217.449，748.580，1268.122，1527.775，1783.282。以麦角甾醇质量（μg）为横坐标，吸收峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为Y=1243.6X-37.7，r=0.9999，表明其在0.20～1.4μg范围内线性关系良好。 

　　2.4.2 精密度考察 取对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，依法测定，重复5次。峰面积分为472.396，473.192，473.671，472.132，473.462。RSD%=0.142%，表明仪器精密度良好。

　　2.4.3 稳定性考察 取供试品溶液，分别于0，6，10，16，32，48h注入高效液相色谱仪，每次进样量为10μL，依法测定。吸收峰面积分别为472.496，473.122，472.344，472.334，474.001，473.829，RSD（%）=0.159%， 结果表明样品在48h内稳定。 

　　2.4.4 重复性考察 精密称取同一批齿囊耙齿菌固体发酵产物供试品共6份，按照供试品溶液的制备方法制备，分别注入高效液相色谱仪，进样量为10μL，测定吸收峰面积值。分别为473.156，472.699，473.798，472.164，473.999，474.102；RSD（%）=0.165%，表明该方法重复性良好。 

　　2.4.5 加样回收率考察 精密称取已知麦角甾醇含量的齿囊耙齿菌固体发酵产物供试品共6份，按供试品制备方法制备，依法测定，测定结果见表1 。 

　　RSD值为1.91%，证明此方法稳定可靠，准确性高，并且操作简单。 

　　2.5 样品含量测定 

　　取齿囊耙齿菌固体发酵产物粉末，按“2.2”项下方法制得供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，测得吸收峰面积分别为473.397，473.310，474.18，代入回归方程计算，麦角甾醇的平均含量为0.021%。