血型鉴定和交叉配血技术的进展(2)
时间:2015-09-22 10:32 文章来源:http://www.lunwenbuluo.com 作者:邱威 林庆芳 点击次数:
4 凝聚胺交叉配血法(MPT)
1980年Palezari和Jiang首先将凝聚胺技术应用在血库作业上。凝聚胺交叉配血,是利用低离子介质减少红细胞周围的阳离子云,以促进红细胞与血清或血浆中抗体结合。聚凝胶分子是带有高价阳离子多聚季镀盐,溶解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷,有利于红细胞凝集,低离子强度溶液也能减低红细胞的Zeta电位,可进一步增加抗原抗体间的吸引力。当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时,与红细胞发生紧密结合,此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胶的正电荷,使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生凝集不会散开;如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体,加入解聚液可使非特异性凝集消失。此法可以检出IgM与IgG两种性质的抗体,能发现可引起溶血性输血反应的几乎所有完全与不完全抗体。据报道,凝聚胺法应用于血型鉴定、交叉配血、不完全抗体的筛选,其灵敏度及特异性远高于其他介质的1-250倍,尤其是Rh系统抗体,但对IgG抗-AB抗体的检出能力较低。此法操作简便、快速,在一些基层医院均已广泛使用。聚凝胺法虽然简便快速,但有可能漏检重要的Kell血型系统及血液中低效价的不规则抗体,而且易受到温度、气候、临床药物、试剂及操作因素的干扰,而使交叉配血出现一些异常结果。
5 微柱凝胶交叉配血法(MGT)
又称微管(板)凝胶抗球蛋白试验。1988年发明的微柱凝胶配血法使抗人球蛋白应用于输血常规检测成为现实,它保持了传统抗球蛋白试验的准确性,而且方法简单,易于批量操作,是新发展的一项免疫学检测技术。此法可在全自动血型分析仪上进行,成为国际安全输血检查的推荐方法,目前国外已广泛应用。
微柱凝胶法是凝胶过滤技术和抗原抗体反应的结合,在微量柱中充满特制的凝胶介质或细小的玻璃珠介质,介质之间的间隙只能使单个红细胞变形通过,起到类似细胞筛的作用。红细胞与相应抗体发生凝聚反应,经离心后不能完全到达柱的底部,而呈现阳性,全部沉到底部者为阴性。微柱依据血清反应特点和试剂不同分为不含特异性抗体的中性柱、含特异性抗体的特异性柱、用于检测IgG类不完全抗体和交叉配血的抗球蛋白柱。此法基本原理虽然与抗人球蛋白法相同,但一般认为抗人球蛋白更为可靠,而微柱凝胶法有发生漏检的可能。这是因为微柱凝胶法需要在凝胶内离心,少量微弱凝集的红细胞在离心外力的作用下可能会散开,或者由于具有易变性的红细胞在通过凝胶孔时变形通过,从而使微弱阳性凝集漏检。与手工凝聚胺MPT法相比,微柱法灵敏度高,能捕捉到十分微弱的抗原抗体反应因而结果更准确,交叉配血时其灵敏度较MPT法高约1-5个滴度。微柱凝胶法具有操作简便、结果稳定、重复性好、标本用量少且结果可保存等优点,试验时增加了孵育步骤,也减少了冷凝集对实验结果的影响。但有文献报道,微柱凝胶法对致敏红细胞和IgG抗-AB血清的检出能力低于抗人球蛋白法和凝聚胺法,对IgG抗-D血清的检出能力高于抗人球蛋白法和凝聚胺法;且红细胞悬液浓度过高时因离心力不足或离心时间过短、血清中含纤维蛋白出现细胞凝块或血液标本被细菌污染、血浆中的蛋白质(包括IG和补体)非特异性的吸附到患者的红细胞表面而发生非特异性凝集反应。
6.现状及措施
随着临床输血技术的快速发展,血型鉴定和交叉配血方法不断的更新和完善,很好的保证了病人的输血安全。但在一些基层医院由于信息沟通不够,技术还很原始,血型鉴定和交叉配血方法仍停留在盐水法。由于盐水配血法只能检测出不相合的完全抗体,因此除盐水法外,还需要应用其它的配血方法来检测是否存在不完成抗体,以避免不完全抗体造成的输血反应。由于传统抗人球蛋白法、酶法本身的局限以及微柱凝胶法仪器昂贵、试剂成本高,目前大多数的基层医院,在未能常规开展红细胞不完全抗体筛查情况下,只能采用盐水法加凝聚胺配血法来进行输血前配血试验。
段慧玲等报道,几种交叉配血方法的灵敏度依次为:微柱凝胶法>凝聚胺法>盐水法。目前,国外基本采用微柱凝胶法,国内也正在普及。何子毅、罗志的研究表明,微柱凝胶法、抗人球蛋白法和凝聚胺法用于交叉配血检测IgG型抗体,如果超出其最低检测限,均存在阳性漏检的现象。因此我们建议在日常交叉配血工作中,采用多种方法同时做交叉配血试验,以防止供受血者血液中存在的效价较低、或效价较低、亲合力也较低的IgG抗体漏检。此外,有些交叉配血试验,由于受到过高量的球蛋白的影响,试验结果也可出现假阳性,此时应对结果做进一步鉴定,以确保交叉配血结果的准确性。