论文投稿_医学论文投稿_核心期刊,职称论文投稿发表_论文部落

　　2.2罗格列酮（30μmol/L）不同干预时间对Ⅰ型前胶原mRNA和蛋白表达的影响

　　30mmol/L的HG孵育心肌成纤维细胞6h后，以含0.1%胎牛血清DMEM培养基继续培养24h，再加入30μmol/L的Ros分别干预18、24、36h，结果显示，HG+30μmol/LRos18h组Ⅰ型前胶原mRNA[（91±10）%]和蛋白（1.31±0.07）的表达低于HG模型组[（109±11）%、（1.57±0.02）]；HG+30μmol/LRos24h组Ⅰ型前胶原mRNA[（67±6）%]和蛋白（1.01±0.04）的表达低于HG+30μmol/LRos18h组[（91±10）%、（1.31±0.07）]；HG+30μmol/LRos36h组Ⅰ型前胶原mRNA[（42±4）%]和蛋白（0.87±0.01）的表达低于HG+30μmol/LRos24h组[（67±6）%、（1.01±0.04）]，差异均有统计学意义（P<0.05）。以上结果显示，相同浓度Ros呈明显的时间依赖性下调Ⅰ型前胶原mRNA和蛋白的表达。见表3及图2。

　　3讨论

　　糖尿病合并心肌病患者的心肌损害包括心肌细胞及心肌间质细胞两个方面。已有的研究主要集中于心肌细胞的损伤，近年来，心肌间质的纤维化及其在糖尿病心肌病的发生、发展中的作用越来越多地受到研究者的重视。糖尿病患者的心肌纤维化进展到一定程度后会导致心室的收缩、舒张功能失调，加速心功能恶化，当心功能出现失代偿时便会出现心力衰竭症状。因此预防和减轻心肌间质胶原沉积及纤维化已成为糖尿病心肌病治疗的重要目标和手段。既往的研究显示，高血糖可导致心肌间质胶原蛋白沉积，从而导致纤维化。高血糖导致胶原大量沉积的机制为高浓度的葡萄糖一方面可促使胶原蛋白的糖基化，另一方面可降低胶原蛋白的降解，引起胶原沉积与心内膜下，导致心肌的纤维化及重构；另外，高血糖会激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）可上调致纤维化的细胞因子的表达[5]，激活PKC信号系统的关键信号蛋白——成纤维细胞生长因子（FGF）的表达[6]，而且高血糖可使转化生长因子-β（TGF-β）异常高表达，后者与其受体Ⅱ结合后可以诱导组织型基质金属蛋白酶抑制剂合成，抑制细胞外基质（ECM）的降解[7]，加重心肌纤维化程度。

　　PPAR-γ作为一个重要的细胞分化的转录因子，在血管与心肌组织均有表达，它能调节糖和脂质代谢，发挥抗炎、抗氧化、抗增殖作用。Guo等[8]报道，上调PPAR-γ的表达后可以明显抑制肝星状细胞胶原蛋白的分泌作用，TZDs药物的典型代表——Ros主要通过活化细胞内的PPAR-γ、增加对胰岛素的敏感性来减轻肝脏、脂肪、肌肉等器官或组织对胰岛素的抵抗。研究报道，Ros通过降低血管紧张肽受体-1的表达[9-10]，可部分阻断AngⅡ的促纤维化作用，从而减轻了胶原的聚集。还有研究显示，BDL大鼠用感染表达PPAR-γ的腺病毒载体后，ColⅠmRNA表达明显降低[13-15]。李洁等[16]研究发现，Ros可减轻胶原蛋白沉积，且这种作用不依赖于血糖的变化，其机制可能与阻断或下调NF-κB信号转导系统或肾素-血管紧张素-醛固酮系统有关。本研究的浓度依赖性实验结果显示，HG+10μmol/LRos组Ⅰ型前胶原mRNA[（91±9）%]和蛋白（1.35±0.03）的表达低于HG模型组[（109±11）%、（1.57±0.02）]；HG+30μmol/LRos组Ⅰ型前胶原mRNA[（62±5）%]和蛋白（1.08±0.04）的表达低于HG+10μmol/LRos组；HG+50μmol/LRos组Ⅰ型前胶原mRNA[（51±4）%]和蛋白（0.93±0.02）的表达低于HG+30μmol/LRos组，差异均有统计学意义（P<0.05）。本研究时间依赖结果显示，HG+30μmol/LRos18h组Ⅰ型前胶原mRNA[（91±10）%]和蛋白（1.31±0.07）的表达低于HG模型组[（109±11）%、（1.57±0.02）]；HG+30μmol/LRos24h组Ⅰ型前胶原mRNA[（67±6）%]和蛋白（1.01±0.04）的表达低于HG+30μmol/LRos18h组；HG+30μmol/LRos36h组Ⅰ型前胶原mRNA[（42±4）%]和蛋白（0.87±0.01）的表达低于HG+30μmol/LRos24h组，差异均有统计学意义（P<0.05）。以上结果显示，不同浓度或相同浓度Ros可明显下调Ⅰ型前胶原mRNA和蛋白的表达，提示Ros在抑制高糖刺激下心肌成纤维细胞Ⅰ型前胶原的表达、抑制心肌纤维化的过程中发挥了作用。

　　综上所述，Ros对高糖刺激下新生大鼠心脏成纤维细胞Ⅰ型前胶原表达的调节在浓度及时间上均呈现依赖关系，可能为临床糖尿病心肌病的有效预防和治疗提供新的思路与切入点。

　　[参考文献]

　　[1]AvogaroA，VigilidKS，NegutC，etal.Diabeticcardiomyopathy：ametabolicperspective[J].AmJCardiol，2004，93（8）：13-16.

　　[2]MehrabiMR，ThalhammerT，HaslmayerP，etal.Theperoxisomeproliferator-activatedreceptorgamma（PPARgamma）ishighlyexpressedinhumanheartventricles[J].BiomedPharmacother，2002，56（8）：407-410.

　　[3]何佳，杨刚毅，李伶，等.罗格列酮对2型糖尿病患者血浆vaspin水平影响的研究[J].中国糖尿病杂志，2013，21（1）：20-23.

　　[4]倪强，张健，姚永良.罗格列酮对DM2患者血清MMP-9和TIMP-1影响的研究[J].放射免疫学杂志，2012，25（6）：649-651.

　　[5]LiC，CaoL，ZengQ.AstragaluspreventsdiabeticratsfromdevelopingcardiomyopathybydownregulatingangiotensinⅡtype2receptors′expression[J].JHuazhongUnivSciTechnologMedSci，2004，24（4）：379-384.

　　[6]HeZ，WayKJ，ArikawaE，etal.DifferentialregulationofangiotensinⅡ-inducedexpressionofconnectivetissuegrowthfactorbyproteinkinaseCisoformsinthemyocardium[J].JBiolChem，2005，280（16）：15719-15726.

　　[7]MizushigeK，YaoL，NomaT，etal.AlterationinleftventriculardiastolicfillingandaccumulationofmyocardialcollagenatinsulinresistantprediabeticstageofatypeⅡdiabeticratmodel[J].Circulation，2000，101（8）：899-907.

　　[8]GuoYT，LengXS，LiT，etal.Effectofligandofperoxisomeprolifemtor-activatedrecepmrgammaonthebiologicalcharactersofhepaticstellatecells[J].WorldJGastroenterol，2005，11（30）：4735-4739.

　　[9]郭晓珍，任利群，刘乃丰.罗格列酮对血管平滑肌细胞血管紧张肽Ⅱ受体2表达的影响[J].中国新药与临床杂志，2007，26（7）：508-512.

　　[10]YangL，ChanCC，KwonOS，etal.Regulationofperoxisomeproliferator-activatedreceptor-gammainliverfibrosis[J].AmJPhysioiGastrointestLiverPhysiol，2006，291（5）：902-911.

　　[11]贾军正，李万玲，郭文芬，等.罗格列酮对兔早期动脉粥样硬化白细胞介素-6、白细胞介素-8表达的影响[J].国际心血管病杂志，2012，39（6）：372-376.

　　[12]冒群.罗格列酮对2型糖尿病患者血浆成纤维细胞生长因子-21及胰岛素敏感性的影响[J].实用临床医药杂志，2012，16（21）：97-98.

　　[13]徐芳，蒙颖，王志禄，等.罗格列酮对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量及SR-BⅠ表达的影响[J].南方医科大学学报，2012，32（12）：1792-1795.

　　[14]张田，魏子峰，秦丽娟，等.罗格列酮对帕金森病模型小鼠中脑黑质iNOS和IL-6表达的抑制作用及其意义[J].吉林大学学报：医学版，2012，38（6）：1124-1128.

　　[15]蒙颖，徐芳，王志禄，等.罗格列酮对泡沫细胞中胆固醇贮存与运输相关蛋白ACAT-1、ABCA-1表达的影响[J].第三军医大学学报，2012，34（22）：2288-2291.

　　[16]李洁，刘乃丰，魏芹.罗格列酮对糖尿病大鼠心肌纤维化及核因子κB、结缔组织生长因子表达的影响[J].中国新药与临床杂志，2008，2（3）：170-172.