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　　[摘要]目的观察抗癌防移片对4T1 小鼠乳腺癌的影响。方法建立4T1 乳腺癌小鼠模型，随机分为空白对照组、模型组、环磷酰胺组和抗癌防移片组，分别给予药物或生理盐水，动态观察给药期间小鼠生活状况。给药4 周后处死小鼠，测定小鼠体质量增加百分数，测量剥离瘤体积，计算瘤体积抑制率以及计数肺转移瘤灶个数。结果与模型组比较，抗癌防移片组小鼠肿瘤生长缓慢，肺转移瘤灶数量明显减少（P<0.05）；与环磷酰胺组比较，抗癌防移片组药物毒副作用小（P<0.05），生活质量高，但其抑瘤防转移作用不及环磷酰胺（P<0.05）。结论抗癌防移片能抑制4T1 小鼠乳腺癌生长与转移，改善小鼠生存质量。
　　[关键词]抗癌防移片；4T1 小鼠乳腺癌；肿瘤体积；瘤体积抑制率；肺转移瘤灶数
　　乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤， 复发与转移是导致女性患者死亡的主要原因。研究证实，25%以上的乳腺癌一开始即发生血行远处转移， 而通过淋巴道转移途径的机会则更多[1]。目前临床上防治乳腺癌复发与转移，主要采用化疗与内分泌治疗，但由于药物的毒副反应和耐药性， 严重影响了治疗的效果。而抗肿瘤中药由于作用的多靶向性、毒副作用低且价廉，越来越受到患者的欢迎。
　　抗癌防移片系曾柏荣教授有效验方， 以扶正祛邪为基本治则，调补肝脾、行气活血、祛痰化湿为治疗大法，用于临床防治乳腺癌术后复发与转移，收效明显[2]。为了证实该复方制剂的疗效并为其临床应用提供实验依据，我们观察了抗癌防移片对BALB/c小鼠4T1 乳腺癌移植瘤模型的抑瘤防移效果及其毒副作用，现将方法与结果报道如下。
　　1 材料与方法
　　1.1 实验材料
　　1.1.1 受试药物抗癌防移片由红参、半枝莲、黄芪、姜黄、重楼等16 味中药组成，湖南中医药大学第一附属医院制剂室提供。批号：20130521， 规格：
　　0.3 g/片，100 片/瓶，每片含生药0.47 g；注射用环磷酰胺购于江苏恒瑞医药股份有有限公司， 批号：
　　201300830，规格：100 mg/瓶。
　　1.1.2 动物及瘤株BALB/c 小鼠48 只， 雌性，6～8周龄，体质量18～20 g，SPF 级，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK9(湘)2011-0003；自发转移性乳腺癌4T1 细胞株，由湘雅医学院细胞培养室提供。
　　1.1.3 主要仪器细胞培养超净工作台，厂家：美国Nuaire，型号：NV-425-400E；水套式C02
　　培养箱，厂
　　家：美国Shellab,型号：2406-2；倒置生物显微镜：厂家：南京江南光电股份有限公司，型号：XD-101。
　　1.2 实验方法
　　1.2.1 造模及分组参照文献方法进行造模[3]。将4T1 乳腺癌细胞置于37 ℃和5% CO2
　　充分湿化条
　　件下用完全培养基培养并传代， 取生长良好的细胞经胰酶消化后， 将细胞浓度调整至1×106 个/mL，随机取36 只小鼠，于右侧第二乳头脂肪垫皮下注射瘤细胞数为2×105 个/只。待肿瘤体积生长到直径约5 mm 左右时，随机分为抗癌防移片组、环磷酰胺组与模型组，余12 只未接种瘤细胞悬液小鼠作为空白对照组。
　　1.2.2 给药方法小鼠每日以药液或生理盐水灌
　　胃，同时每2 日以药液或等体积生理盐水腹腔注射。
　　给药剂量按人鼠体表面积折算法计算[4]，抗癌防移片组生药量为5.2 g/(kg·d)，每日予抗癌防移片悬浊液灌胃，同时每2 日予生理盐水腹腔注射；环磷酰胺组每2 日予环磷酰胺0.04 g/(kg·d)腹腔注射，同时予生理盐水灌胃； 模型组与空白对照组予生理盐水灌胃，每2 日予生理盐水腹腔注射，连续给药4 周。
　　1.2.3 实验标本取材末次给药结束后，次日清晨，称量体质量，脱颈处死小鼠，摘除肿瘤，剔除筋膜，切取部分瘤组织， 切取体积约为0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm （取材时避开瘤体中央液化坏死区与瘤体外周）后加入20%多聚甲醛固定，备行病理切片及免疫组化检测；开胸取肺脏，投入到Boains 固定液（饱和苦味酸∶甲醛∶冰醋酸=75∶25∶5）中固定24 h 后，用无水乙醇冲洗至肺组织颜色恢复。
　　1.3 检测指标
　　1.3.1 瘤体积与瘤体积抑制率给药结束后， 处死小鼠，完整剥离接种部位肿瘤，游标卡尺测量并计算瘤体积（VT）。计算公式为：VT=(a×b2)/2，a 为肿瘤最长径，b 为垂直于最长径的最大横径[5]。计算各组瘤体积抑制率公式：瘤体积抑制率（%）=（模型组平均瘤体积-治疗组平均瘤体积）/模型组平均瘤体积×(P<0.05); 2) Compared with cytoxan group, the negative effect of Kang'ai Fangyi Tabelt groupis less significantly (P<0.05), having better quality of life, but the function of Cytoxan 'stumor inhibition and prevention of tumor metastasis was stronger. Conclusion Kang'ai FangyiTablet can inhibit the growth and metastasis of 4T1 breast cancer, improving the qualityof mouse life.
　　〔Keywords〕Kang'ai Fangyi Tabelt; 4T1 mice breast cancer; tumor volume; the inhibitionrate of tumor volume; the number of lung metastasis第 4 期 侯 超，等 抗癌防移片对 4T1 小鼠乳腺癌影响的研究 7表3 3 组小鼠体质量增加百分率的比较
　　组别
　　模型组
　　环磷酰胺组
　　抗癌防移片组
　　n
　　12
　　12
　　12
　　体质量增加率（x±s，%）
　　2.89±1.97
　　1.71±3.05
　　6.58±4.31△*
　　100%[5]。
　　1.3.2 肺转移结节数与肺转移抑制率处死小鼠
　　后，开胸取出肺脏，将肺组织于Bouins 固定液中固定24 h， 再用无水乙醇浸泡至肺组织恢复颜色，摄像头放大镜下计数全肺结节数目。肺转移抑制率（%）=（模型组平均肺表面转移结节数-治疗组平均肺表面转移结节数）/模型组平均肺转移结节数×100%。